长pcr引物设计以及扩增条件我有个环状的大概35kb的基因组需要全部扩增.我想分几段来扩增,每段大概5000-8000bp左右吧.本人有takara公司的la-taq体系,需要怎样设计引物啊?有哪些原则,有这方面的
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/14 20:16:48
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长pcr引物设计以及扩增条件我有个环状的大概35kb的基因组需要全部扩增.我想分几段来扩增,每段大概5000-8000bp左右吧.本人有takara公司的la-taq体系,需要怎样设计引物啊?有哪些原则,有这方面的
长pcr引物设计以及扩增条件
我有个环状的大概35kb的基因组需要全部扩增.我想分几段来扩增,每段大概5000-8000bp左右吧.本人有takara公司的la-taq体系,需要怎样设计引物啊?有哪些原则,有这方面的专家吗?
长pcr引物设计以及扩增条件我有个环状的大概35kb的基因组需要全部扩增.我想分几段来扩增,每段大概5000-8000bp左右吧.本人有takara公司的la-taq体系,需要怎样设计引物啊?有哪些原则,有这方面的
引物长度和专一性
常见的引物长度为18-30个碱基.短的引物(≤15碱基)能非常高效地结合,但是它们的专一性不够.较长的引物能提高专一性,然而退火效率低,从而导致PCR产量低下.同时应避免编码单一序列和重复序列的引物.
平衡GC含量,避免GC-和AT-富集区域
引物的GC含量应介于40%~60%之间.应避免聚-(dC)-或聚(dG)-区域,因为它们会降低退火反应的专一性.聚-(dA)-和聚(dT)-也应避免,因为这样会形成不稳定的引物-模板复合物,从而降低扩增效率.
引物设计遵循常规就可以,注意别太短,还有尽量减少错配;扩增程序可以看说明,5~8K没问题,不难扩增,注意算好延伸时间就好,我之前做过一段20K左右的扩增,如果您实验中有问题可以再联系我私聊。
如果实验室有钱 直接给公司做primer walking就行