作业帮速率法和重氮法的原理是什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/30 19:09:56
速率法和重氮法的原理是什么?
速率法和重氮法的原理是什么?
速率法和重氮法的原理是什么?
1.速率法测定ALT原理
在酶反应确定的条件下,血清中ALT和底物作用,产生丙酮酸.底物中的乳酸脱氢酶(LDH)和还原辅酶I(NADH)使丙酮酸还原成乳酸,同时还原辅酶I被氧化成辅酶I（NAD）.腐于还原辅酶I在340nm（严格讲是339nm）处有最大光吸收,因此伴随还原辅酶I不断被氧化的同时,A340.光吸收值随芬下降,下降速率和ALT活力成比例,籍此测定ALT活力.
2.重氮法测定血清总胆红素和直接胆红素（结合胆红素)
测定原理:血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应产生偶氮胆红素,所以称为直胆,又称1min胆红素测定,非结合胆红素测定时要以咖啡因、苯甲酸钠为加速剂破坏胆红素氢键再与重氮试剂反应,抗坏血酸破坏剩余重氮试剂,加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由530nm转到598nm,非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度降至可忽略不计,使灵敏度和特异性升高,最后形成的绿色是由兰色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成.
试剂：（1）咖啡因 （2）碱性酒石酸钠液 （3）亚硝酸钠液
（4）对氨基苯磺酸溶液 （5）重氮试剂（将3、4混合）
（6）5g/L NaN3 （7）胆红素标准液
操作：
总胆管 结合管 对照管
血清（ml） 0.2 0.2 0.2
咖啡因-苯甲酸钠试剂（ml） 1.6 1.6
对氨基苯磺酸溶液（ml） 0.4
重氮试剂（ml） 0.4 0.4
混匀后,总胆管置室温10min,结胆管置37℃1min
NaN3（ml） 0.05
咖啡因-苯甲酸钠试剂（ml） 1.55
碱性酒石酸钠溶液 1.2 1.2 1.2
以对照调零,测各管A600,查标准曲线
正常参考值：血总胆红素 5.19umol/L(0.1.1mg/dl)
血清结合胆红素 1.6.8umol/L(0.0.4mg/dl)