假设我有一个引物,上游引物Tm为65.2℃,下游为64.6℃.请问怎样设计退火温度梯度,

假设我有一个引物,上游引物Tm为65.2℃,下游为64.6℃.请问怎样设计退火温度梯度, 退火温度低会对PCR产生什么影响?我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?退火 上游引物和下游引物有什么区别 荧光定量PCR引物中含简并引物可以吗?设计荧光定量PCR引物时,保守片段中,上游引物有一个碱基不保守,下游引物有2个碱基不保守,因此在该位置设计为简并引物,不知道这样做可不可以?另外说 miRNA的qPCR的引物Tm值有什么要求吗?60℃左右行吗,还是上游引物需要高点啊? 什么是上游引物? 请问各位大侠 如果我有两条引物这两个引物上游序列只有一个碱基不同,下游序列完全相同,可以叫公共引物吗 什么是上游引物和下游引物? 反转录PCR的引物也分为上游引物和下游引物吗.是不是和普通的PCR引物不一样啊.我有个很纠结的问题.刚才看了一个PCR 原理的视频顿时纠结了,视频上是双链DNA,上游引物和下游引物分别结合在 引物的Tm值是什么 upm是俩个引物吗?有上游和下游?还是就 一个序列啊? 引物3'端 5'端,引物3'末端5'末端?实在是理解不了什么是引物3'端,5'端.引物是上游引物下游引物,一个是3'---5',另一个是5'----3',引物3'端, 我的引物设计有30个碱基,tm值分别为88和84,是不是太高了?那退火温度怎么设定啊? 求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢? pcr反应体系如何建立?我做的是基因组的pcr,想扩增其中一个基因的一段,我设计的引物 上游 GCGTCGACTACAGCCTGTTTCAGCACTT 其中tm值是60.3 G和C的含量是 53.6下游 GCCTTAAGCACCCATTGCACATTCCA 其中tm值是58.3 G和C的 PCR中Tm值的疑问我有一段引物，比如NNNNNN，然后我在这段引物前面加了标记，所以是XXXXXNNNNN，那么它的Tm值会有变化么？ TAIL-PCR引物是如何结合到模板上的?以分离已知基因的启动子为例,TAIL-pcr 有三个嵌套特异引物结合到已知序列上也就是已知基因上,另外一个随机短引物结合到已知序列上游,如果这样的话就能 上游引物和下游引物为什么分别加