反转录的实验步骤要做实验了,越具体越好要写实验报告

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/30 02:31:37
反转录的实验步骤要做实验了,越具体越好要写实验报告
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反转录的实验步骤要做实验了,越具体越好要写实验报告
反转录的实验步骤
要做实验了,
越具体越好
要写实验报告

反转录的实验步骤要做实验了,越具体越好要写实验报告
你按照买的反转录试剂盒来做就行.
（1）、从细胞中提取细胞总RNA
用GIBCO公司的Trizol试剂提取细胞总RNA.按试剂使用说明操作:离心收集细胞,倾去细胞液,向沉淀中加1 ml Trizo1(每106-107细胞),混匀至室温5分钟,用1 ml加样器反复吹打,直至细胞完全裂解成均一溶液,不粘稠时为止.随后加入200ul氯仿,剧烈振荡15秒钟,室温放置5分钟,然后,4 0C ,12000rpm离心5分钟,将上层水相转移至一Eppendorf管中,加入500ul异丙醇后混匀.4 0C , 1 5000rpm离心15分钟,倾出异丙醇.用70%乙醇洗涤沉淀一次,置冰上,让残余乙醇挥发殆尽.溶于适量的DEPC水中,紫外分光仪测定RNA的纯度及含量,分装冻存于一700C保存.
（2）、反转录成cDNA第一链(参照产品说明)
在20ul体系中,加入1ug总RNA, 1 ul oligo dT12_l8 ( 500ug/ml ). RNase-Free水,70 0C温育10分钟后立即冰浴冷却,继续加入4ul 5 x Buffer, 2ul 0.1 M DTT, 1ul IOMm dNTPs ( IOMm/种),混匀后于42℃保温2分钟,加入1ul( 200U)的反转录酶,42℃继续温育50分钟.700C 15分钟灭活反转录酶.
（3）、 引物设计
(4)过程: 以1ulcDNA为模板,在50ul体系中含有Taq酶为2单位,dNTPs浓度为200uM,引物各为0.2uM.扩增22个循环.取8ul电泳.

1、从细胞质中获得RNA
2、以该RNA为模板按照碱基互补配对为原则反转绿得单链的DNA
3、以得到的DNA为模板碱基互补配对为原则反转绿得双链的DNA

反转录的实验步骤要做实验了,越具体越好要写实验报告 RNA的提取和反转录的实验步骤? 提取RNA反转录测序的问题小弟要提取RNA做反转录对抗一种酶的基因进行测序,因为是新手,以前没有接触过此类实验,求从提取RNA开始到测序的实验步骤,越详细越好,先谢过! 焊接的熔深实验怎么做?具体的操作步骤是什么要具体的步骤 分馏实验步骤要具体点儿的 牙膏中二氧化硅的检验方法,求具体的化学实验步骤,高中生做实验用. 铁碳微电解实验如何做 处理炼油废水 要具体的步骤 试剂量 砼抗压实验步骤 要具体的建筑材料的 液体蒸发快慢与液体的种类有关吗?谁做了实验证实了的?实验步骤要哦~ 蛋白质检验实验步骤,要具体,清楚的,只要蛋白质 纤维素制乙醇的具体实验步骤 H2还原氧化铜的具体实验步骤 通过实验证明吸入空气与呼出气体成分不同要具体的实验步骤,越详尽越好, 请问实验室进行橡胶硫化是怎么做的?具体的实验步骤是什么?我们实验室要做顺丁橡胶的硫化,可是我不太明白具体的实验步骤,麻烦指导~ 声音在固体中的传播速度是否比在空气中的速度大?应该怎样做实验,具体的实验步骤~急用~我晕，我要的是实验步骤吖~ 要开始做基因克隆的实验了,请问大概的步骤有哪些啊! 谁能告诉我麻棉混纺织物的双氧水—尿素漂白工艺这个实验怎么做,要具体的实验过程与步骤 用离子交换法怎样分离肝素阿?要做这个实验,需要什么器材,材料,还有具体的步骤是什么?