鉴定乳酸菌需要做哪些生理生化试验?结果如何?请做过乳酸菌的人回答`.最好能有方法 的 和配料的.

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细菌的生理、生化试验简介
微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物.因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：
一、糖酵解试验
　　不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异,或能利用或不能利用,能利用者,或产气或不产气.可用指示剂及发酵管检验.
　　试验方法：以无菌操作,用接种针或环移取纯培养物少许,接种于发酵液体培养基管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种.接种后,置36±1.0°C培养,每天观察结果,检视培养基颜色有无改变（产酸）,小倒管中有无气泡,微小气泡亦为产气阳性,若为半固体培养基,则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡,有时还可看出接种菌有无动力,若有动力,培养物可呈弥散生长.本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力,从而进行各种细菌的鉴别,因而每次试验,常需同时接种多管.一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫,溴百里蓝和An-drade指示剂.
二、淀粉水解试验
　　某些细菌可以产生分解淀粉的酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖.淀粉水解后,遇碘不再变蓝色.
　　试验方法：以18~24h的纯培养物,涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种,试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中,于36±1°C培养24~48h,或于20℃培养5天.然后将碘试剂直接滴浸于培养表面,若为液体培养物,则加数滴碘试剂于试管中.立即检视结果,阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化.阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色.
　　淀粉水解系逐步进行的过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间,培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系.培养基pH必须为中性或微酸性,以pH7.2最适.淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱,因而以临用时制备为妥.
三：V-P试验
　　某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中的氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物,称V－P（+）反应.
　　试验方法：
　　1）O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养48h,培养液1ml加O’Meara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml,摇动试管1~2min,静置于室温或36±1°C恒温箱,若4h内不呈现伊红,即判定为阴性.亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者.
　　2）Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基,于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入a萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml,摇动2~5min,阳性菌常立即呈现红色,若无红色出现,静置于室温或36±1°C恒温箱,如2h内仍不显现红色、可判定为阴性.
　　3）快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环,乳化接种于其中,加入5%α-萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动后放置5min,判定结果.不产酸的培养物不能使用.
　　本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别.在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时,通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生,故应省去或以氯化钠代替.
四：甲基红（Methyl Red）试验
　　肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸,进一步分解中,由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培养基PH值下降至pH4.5以下,使甲基红指示剂变红.
　　试验方法：挑取新的待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）3~5天,从第二天起,每日取培养液1ml,加甲基红指示剂1~2滴,阳性呈鲜红色,弱阳性呈淡红色,阴性为黄色.迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果.
　　甲基红为酸性指示剂,pH范围为4.4~6.0,其pK值为5.0.故在pH5.0以下,随酸度而增强黄色,在pH5.0以上,则随碱度而增强黄色,在pH5.0或上下接近时,可能变色不够明显,此时应延长培养时间,重复试验.
五：靛基质（Imdole）试验
　　某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚.吲哚的存在可用显色反应表现出来.吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物.
　　试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养基管,于36±1°C培养24h时后,取约2ml培养液,加入Kovacs氏试剂2~3滴,轻摇试管,呈红色为阳性,或先加少量乙醚或二甲苯,摇动试管以提取和浓缩靛基质,待其浮于培养液表面后,再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴,在接触面呈红色,即为阳性.
　　实验证明靛基质试剂可与17种不的靛基质化合物作用而产生阳性反应,若先用二甲苯或乙醚等进行提取,再加试剂,则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色,因而结果更为可靠.
六、硝酸盐（Nitrate）还原试验
　　有些细菌具有还原硝酸盐的能力,可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等.亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验.
　　试验方法：临试前将试剂的A（磺胺酸冰醋酸溶液）和B（α－萘胺乙醇溶液）试液各0.2ml等量混合、取混合试剂约0.1ml、加于液体培养物或琼脂斜面培养物表面,立即或于10min内呈现红色即为试验阳性,若无红色出现则为阴性.
　　用α-萘胺进行试验时,阳性红色消退很快、故加入后应立即判定结果.进行试验时必须有未接种的培养基管作为阴性对照.α-萘胺具有致癌性、故使用时应加注意.
七、明胶（Gelatin）液化试验
　　有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶）,能将明胶先水解为多肽,又进一步水解为氨基酸,失去凝胶性质而液化.
　　试验方法：挑取18~24h待试菌培养物,以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基.于20~22℃培养7~14天.明胶高层亦可培养于36±1℃.每天观察结果,若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细菌液化,如确被液化,即为试验阳性.平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂,若为阳性,10~20min后,菌落周围应出现清晰带环.否则为阴性.
八、尿素酶（Urease）试验
　　有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色.尿素酶不是诱导酶,因为不论底物尿素是否存在,细菌均能合成此酶.其活性最适pH为7.0.
　　试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中,摇均,于36±1℃培养10,60和120min,分别观察结果.或涂布并穿刺接种于琼脂斜面,不要到达底部,留底部作变色对照.培养2,4和24h分别观察结果,如阴性应继续培养至4天,作最终判定,变为粉红色为阳性.
九、氧化酶（Oxidase）试验
　　氧化酶亦即细胞色素氧化酶,为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶,氧化酶先使细胞色素C氧化,然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,产生颜色反应.
　　试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴,阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色,Ewing氏改进试剂呈蓝色.阴性者无颜色改变.应在数分钟内判定试验结果.
十、硫化氢（H2S）试验
　　有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物,而产生硫化氢气体,硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物.
　　试验方法：在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中,沿管壁穿刺接种,于36±1℃培养24~28h,培养基呈黑色为阳性.阴性应继续培养至6天.也可用醋酸铅纸条法：将待试菌接种于一般营养肉汤,再将醋酸铅纸条悬挂于培养基上空,以不会被溅湿为适度；用管塞压住置36±1℃培养1~6天.纸条变黑为阳性.
十一、三糖铁（TSI）琼脂试验
　　试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物,穿刺接种并涂布于斜面,置36±1℃培养18~24h,观察结果.
　　本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）.葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色.
十二、硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验
　　试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约1/2深度,置36±1℃培养18~24h,观察结果.培养物呈现黑色为硫化氢阳性,混浊或沿穿刺线向外生长为有动力,然后加Kovacs氏试剂数滴于培养表面,静置10min,若试剂呈红色为靛基质阳性.培养基未接种的下部,可作为对照.