荧光定量PCR引物设计的问题如题,我有一个疑问,就是我现在有一些转录组测序的序列,但是只是部分序列,还没有全长,但是我想QRT-PCR.设计引物时用测得的序列设计,但是总是没有完美的,有二聚

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/12/01 03:32:00
荧光定量PCR引物设计的问题如题,我有一个疑问,就是我现在有一些转录组测序的序列,但是只是部分序列,还没有全长,但是我想QRT-PCR.设计引物时用测得的序列设计,但是总是没有完美的,有二聚
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荧光定量PCR引物设计的问题如题,我有一个疑问,就是我现在有一些转录组测序的序列,但是只是部分序列,还没有全长,但是我想QRT-PCR.设计引物时用测得的序列设计,但是总是没有完美的,有二聚
荧光定量PCR引物设计的问题
如题,我有一个疑问,就是我现在有一些转录组测序的序列,但是只是部分序列,还没有全长,但是我想QRT-PCR.设计引物时用测得的序列设计,但是总是没有完美的,有二聚体,有的有错配.扩出来效果不好,但是用primer5找不出好的,是不是我的序列只是部分的?还是这段序列没有符合荧光定量条件要求的引物位点?要是这样该怎么办啊?我的序列是小麦的.我还想知道荧光定量有没有不合适用的情况啊或者有没有荧光定量的替代方案啊?

荧光定量PCR引物设计的问题如题,我有一个疑问,就是我现在有一些转录组测序的序列,但是只是部分序列,还没有全长,但是我想QRT-PCR.设计引物时用测得的序列设计,但是总是没有完美的,有二聚
你是直接用primer5设计的引物吗?有时候时会遇到你说的问题,你可以在软件设计出来的基础上,手动的把你的引物移动几个碱基,可以减少一些二聚体或错配,而且,软件给出来的这些结果都只是计算值,你实际应用的时候,退火温度都要五六十度了,即使有部分二聚体在这个温度下也打开了,如果害怕出问题,你可以针对同一转录组多设计几对引物,然后选一组最好的用

LS说得很对

  1. 你可以手动改动几个碱基，降低引物里面的dimer，主要是3'端没有dimer就好。

  2. 错配问题，可以用taqman探针来检测，但是很贵，实在设计不出来再用。

  3. 可以多设计几对，然后做个引物测试，挑选出几对好的，再做QRT。

我还有个问题是，有些试剂公...

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LS说得很对

  1. 你可以手动改动几个碱基，降低引物里面的dimer，主要是3'端没有dimer就好。

  2. 错配问题，可以用taqman探针来检测，但是很贵，实在设计不出来再用。

  3. 可以多设计几对，然后做个引物测试，挑选出几对好的，再做QRT。

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荧光定量PCR引物设计的问题如题,我有一个疑问,就是我现在有一些转录组测序的序列,但是只是部分序列,还没有全长,但是我想QRT-PCR.设计引物时用测得的序列设计,但是总是没有完美的,有二聚 荧光定量PCR的Tapman 探针引物怎么设计 实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求? 实时荧光定量PCR 引物与普通PCR一样吗两者间用的引物有什么区别,可以用一样的序列去设计吗 荧光定量pcr引物有多少引物二聚体合适... 实时荧光定量pcr中 sybgreen染料法 tacman探针 半定量PCR的 引物设计有什么区别 可以通用么如题：引物有什么区别,能否通用 ,除了查文献外还可以如何设计引物 荧光定量PCR引物和探针怎么设计? 荧光定量pcr引物设计原理在做荧光定量PCR预试验,先用普通pcr仪器跑的,模板是用CDNA.在设计引物的时候是不是必须俩个外显子跨过一个内含子?就是上下游引物必须落在俩个外显子上?我就按这 荧光定量PCR引物设计本人在做荧光定量PCR之前,先用Primer 3.0设计了目的基因的引物,用于半定量PCR,而且也把引物放入NCBI中进行了blast比对,得到引物为特异性引物,半定量PCR效果也跟预期一样,电 实时荧光定量PCR 的引物能不能用来做RT 荧光定量PCR问题荧光定量PCR设的引物260bp可以用吗?师姐他们说最好在100--150之间. 已知序列的ORF（有内含子）和3'UTR,做实时荧光定量PCR从哪里设计引物可以排除DNA干扰 怎么用primer express3.0设计实时荧光定量PCR引物,能不能提供具体的操作流程 荧光定量PCR引物中含简并引物可以吗?设计荧光定量PCR引物时,保守片段中,上游引物有一个碱基不保守,下游引物有2个碱基不保守,因此在该位置设计为简并引物,不知道这样做可不可以?另外说 PCR引物设计应该注意的问题? 一条非全长基因序列荧光定量pcr引物如何微调（指用primer或primerselect设计出的引物总是不太好） 荧光定量PCR引物设计为什么要在100-200bp之间 怎样用Primer5设计荧光定量PCR引物,怎样设置各种参数,