引物的长度包括酶切位点在内么?计算Tm值以及计算GC含量时用算酶切位点的么?

引物的长度包括酶切位点在内么?计算Tm值以及计算GC含量时用算酶切位点的么? 引物的TM值如何计算 如何计算引物的Tm值? 如何计算引物的Tm值? 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, 带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, 引物的Tm值是什么 请教如何计算引物的Tm值?最好能给出计算公式等. PCR引物设计中,引物上是否需要每个碱基都与模板链结合?为了得到想要的Tm值,或是保证长度,不产生二聚体等,可不可以有在引物上添加一些不配对的碱基?如下图：可以的话,会对扩增有影响么? 一般说,PCR 扩增产物片段长度 包不包括引物在内?荧光定量PCR扩增长度一般为80到150 ,我想知道包不包括引物的长度? PCR中Tm值的疑问我有一段引物，比如NNNNNN，然后我在这段引物前面加了标记，所以是XXXXXNNNNN，那么它的Tm值会有变化么？ 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀?还有,好多的Tm值都代表什么呢?引物Tm60多,二级结构的Tm达到40度有关系吗?G值有什么用 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 如何理解Tm= 4(G+C)+2(A+T).比如说一段引物的G+C含量为40%,那么这段引物的Tm值是多少? 引物的退火温度如何计算,用tm值减去5度,靠谱不?用1m na+的还是50mmna+? 试举两个进行PCR引物设计的生物信息学程序,并选用其中的任何一个对GenBank登录号为MMU41636 的序列设计一对PCR引物,要求产物长度为1000-1500bp,引物Tm值范围为40℃-60℃,引物GC%为40%-60%,请写出具体 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? PCR中 两个引物的Tm值相差太大有什么害处?