重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/06 00:37:46
重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑
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重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑
重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带
我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑是阳性（条带亮度弱,但清楚）的目的大小的条带,但第一种pcr鉴定时没有目的条带,阴性对照（以空质粒为模板）没有条带；第二种pcr鉴定时有目的基因大小的条带,但阴性对照也有.
请各位老师不吝指教,pcr鉴定的可行度高吗,有没有测序的必要,还是重新做?
谢谢

重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑
pcr的鉴定可信度还是比较高的,当然这是针对确认的结果来说,也就是说通过pcr已经确证了,再去测序,以排除可能性较小的假阳性和克隆过程中产生的突变.
你现在是pcr的问题还没有解决,连阴性都有条带,应该先把pcr的问题解决了.我觉得先要确定你的引物有没有问题?你的阴性对照是否真的“阴性”?是不是pcr体系有污染了,比如水和buffer?等
总之pcr通过了再测序,pcr没通过默认克隆没有成功

重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑 挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多 菌液PCR有条带,但提不出质粒,为什么? PCR产物电泳鉴定时Marker条带竟然没有.我前两天跑电泳的时候,PCR产物倒是能看到条带,就是marker条带没有了,不晓得是怎么回事?以前跑电泳时,Marker条带都很清晰的. 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 重组质粒酶切后琼脂糖凝胶电泳未出现相应条带的原因有重组质粒的条带,但是没有酶切后的细菌质粒条带和目的基因条带.这样的情况原因是什么? 琼脂糖凝胶电泳双酶切为什么没有目的基因条带我用的10000的MARKER,我的重组质粒有6000多BP,质粒5300多BP,电泳后发现只有重组质粒的条带和切下来的质粒条带,在1000BP左右并没有发现我目的基因 酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶 质粒PCR后电泳出现 很多条带 怎么回事啊? 质粒PCR后电泳出现 很多条带 怎么回事啊? 质粒双酶切质粒大小正确,菌落PCR,也有条带,但是双酶切就是不成功,有什么建议吗? 质粒双酶切吼取哪个条带 质粒酶切后无条带是什么原因 质粒酶切后无条带是什么原因 我最近做PCR,目的条带是321bp,但是我扩出来的阴性对照都有条带,而且和样本条带扩出来的一样我级别太低，没办法上传图片，我用的是PCR Master Mix，两种不同厂家的做出来的阴性对照都有条带 PCR产物为什么会出现100~200bp的条带我用菌落PCR检测library质粒扩增质量,引物用的是takara的M13正反引物,目的质粒基因长度为~500bp.PCR完后电泳图谱显示~750bp有较明显条带,很奇怪的就是100~200bp有 我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因.另外一个真菌能扩增出来条带 PCR电泳marker条带清晰,但是样本的条带有的缺失,有的是有条带,但不是我所想要的,请问有什么原因?