引物的EB染色问题最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于是重新合成引物,电泳检测,仍然是相同的结果.在此想问问各位同行高

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/24 01:46:56
引物的EB染色问题最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于是重新合成引物,电泳检测,仍然是相同的结果.在此想问问各位同行高
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引物的EB染色问题最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于是重新合成引物,电泳检测,仍然是相同的结果.在此想问问各位同行高
引物的EB染色问题
最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于是重新合成引物,电泳检测,仍然是相同的结果.
在此想问问各位同行高手,对于短的ssDNA,EB染色是否与DNA序列有关?如果有关,都有些什么关系?
回fengfeixue0219:我是拿引物直接跑的PCR.
谢谢各位的回答,其实你们说的我也查过,我想问的是染色的强弱跟DNA序列都有些什么关系?
多谢fengfeixue0219,以后设计引物得更小心了.

引物的EB染色问题最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于是重新合成引物,电泳检测,仍然是相同的结果.在此想问问各位同行高
EB的染色原理是能够嵌入到dsDNA的大沟之中,形成复合物而在紫外光下发出荧光.
引物是ssDNA,如果不能形成二级结构的话,EB是不能有效染色的.
你指的跑不出带,是指PCR结束后没有引物二聚体,还是引物直接电泳没有条带?
说实话,EB染色和序列碱基次序是没有关系的.EB的染色只和序列长度有关.并且我要指出的是,如果你的引物能够跑出很强的带,那说明引物可以形成发卡装二级结构,不适合作为引物使用.因为引发率会很低.

溴化乙锭可以用来检测单链或双链核酸（DNA或RNA）。但是染料对单链核酸的亲和力相对较小，所以其荧光产率也相对较低。事实上，大多数对单链DNA或RNA染色的荧光时通过染料结合到分子内形成较短的链内螺旋产生的。
从上面内容可以知道待扩增区域的碱基组成以及是否会形成适于溴化乙锭结合的二级结构会在很大程度上影响其与溴化乙锭的结合。...

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溴化乙锭可以用来检测单链或双链核酸（DNA或RNA）。但是染料对单链核酸的亲和力相对较小，所以其荧光产率也相对较低。事实上，大多数对单链DNA或RNA染色的荧光时通过染料结合到分子内形成较短的链内螺旋产生的。
从上面内容可以知道待扩增区域的碱基组成以及是否会形成适于溴化乙锭结合的二级结构会在很大程度上影响其与溴化乙锭的结合。

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引物的EB染色问题最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于是重新合成引物,电泳检测,仍然是相同的结果.在此想问问各位同行高 PCR引物设计应该注意的问题? PCR引物的问题PCR时,单引物可以扩增模板吗? 关于转基因植株检测的问题我做的是大豆转基因，最近做检测，用328bp的引物做PCR时质粒很正常，可是基因组在328bp左右没有出现条带，而在700bp出现很亮的条带；用35S引物PCR，在目的条带那 引物分哪几种?扩基因所用的引物和做RT-PCR的引物一样吗? pcr引物的作用 realtime pcr 预实验的问题做realtime pcr 时,设计好引物后,用普通的pcr仪跑没有条带,是怎么回事啊?这样还能做realtime吗?排除引物设计的问题,因为是公司设计的. RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul （浓度100ng）引物上下游各1u RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul （浓度100ng）引物上下游各1u 实时荧光定量PCR 的引物能不能用来做RT 做PCR时引物过量会产生什么样的条带 引物设计 测序 PCR 探针测序,PCR,探针引物设计的不同?分别要注意哪些问题? PCR的引物怎样设计, 什么是PCR引物的特异性 pcr中引物的作用 rt pcr的引物设计 pcr与引物的关系 PCR的引物怎样选取?