现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来回收的片段1K左右

现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来回收的片段1K左右 T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长但是在进一步做PCR验证时（扩增目的基因）,却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物 PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么? 对于一段有重复序列的片段如何扩增,只是一个基因的中间的部分序列,准备扩增做overlap.我在两端设计的无配对引物,无法扩增目的条带,不知对PCR 条件有什么要求? 胶回收：雀式pcr第一对pcr引物扩增后 ,产物电泳得到两条带,那么我该切哪一条啊?怎么知道目的片段的bp?不是目的片段的bp，图片中左边第一条是marker，第五第六条各有两条带，在1000 和1400的 菌落pcr假阳性如图,菌落pcr,2-6道扩增0.9kb目的条带,7-12扩增1.0kb目的条带.7,8道扩增的1.0kb有点偏离,9道为非特异性扩增,12道在1.0kb位置有隐约条带,是否为非特异性扩增?mark跑直线,而条带两端上扬 我的目的基因目前只知道部分序列,现在需要克隆出这个基因全长来,我已经合成了RACE模板及引物,进行了PCR,一直没有出来目的条带 检测血清的病毒为阴性,PCR确能扩增出目的条带,测序结果也对,是怎么回事? 用Pfu酶和Taq在相同条件下进行PCR,结果是Pfu酶能够扩增到目的条带,而Taq酶没有,是为什么呢?提取出的DNA用TE溶解后加了RNase,但是RNase对PCR没有太大的影响啊 pcr扩出来的条带用marker比对偏大在基因组上扩增3k的片段,用DL5000和1 kb的marker跑胶出来都显示的是5k,这是怎么回事,不知道是不是我的目的条带, pcr扩增时出现多条带,目的条带很亮,多余的带比目的条带大,是怎么回事 转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带（即之前的连接产物,约3k ISSR为什么扩增不出条带我现在做的是ISSR-PCR,体系都已经优化完成,曾经P出了较好的带,但是最近不知什么原因,好多时候都是白板无带,只有Marker很清晰.25ul反应体系中,加入模板DNA 1ul (5ng)ISSR引 是否是引物二聚体我需要扩增出300bp左右的片断,用2%的琼脂糖凝胶90V电压下电泳30分钟后,根据marker出现了大约300bp的扩增片断,但在它前面隐约有一条较宽的条带,很淡但能看清是一条带.这是否 PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引 如何确定PCR扩增产物分子量做PCR实验,产物琼脂糖凝胶电泳成像后得一条带,要求与mark对比确定扩增产物分子量. 细菌基因组DNA 的PCR扩增问题我提取了革兰氏阴性菌的基因组DNA并用几种不同的引物对其进行PCR扩增,意在扩增一段特定的基因片段,其中一对引物扩增出了两条带,一条500bp左右,为目的条带,另