PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/30 17:33:12
PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引
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PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引
PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物
总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引物二聚体.下过一段该序列基因,比对了一下,引物应该没啥问题

PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引
建议：
1、用引物在ncbi里去查,看看是否完全匹配,国外文献尚有错误,如果是国内的.；
2、不是提高退火温度,而是降低,看看是否有非特异性的产物；
3、有条件的话,建议找一个阳性对照,质粒最方便.如果没有这个基因的,可以找一个看家基因的,再合成一对引物,做阳性对照.检查整个体系中是否有问题.阳性对照和阴性对照是做PCR必须的,出了问题就容易判断了

1 模板是什么？总DNA？质粒？RT产物？尝试将模板稀释10倍
2 做个温度梯度。
3 文献里的引物有可能是不对的，写文章的时候引物信息不准确，编辑是没办法查的。我碰到过无数次……你比对的序列是登陆到NCBI的，单具体到某一株系，还是可能产生突变。换一对再试试吧。我的模板是总DNA，我下的NCBI里面登陆的，引物比对100%符合，是与文献里面引物设计的区域一致。理论上如果体系不好，...

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1 模板是什么？总DNA？质粒？RT产物？尝试将模板稀释10倍
2 做个温度梯度。
3 文献里的引物有可能是不对的，写文章的时候引物信息不准确，编辑是没办法查的。我碰到过无数次……你比对的序列是登陆到NCBI的，单具体到某一株系，还是可能产生突变。换一对再试试吧。

收起

按照正常的思路，一样一样的排除原因。这么小的片度，应该是比好扩的，所以首先排除模板的问题：可以用同样的模板扩增一下其他片段，来排除模板的问题。
第二，排除一下酶的问题：用同样的酶是否能扩增出其他片段？
我觉得PCR条件的可能性不大，引物的可能性也不大。如果是CDNA模板的话，还有一个表达量的问题。
希望有用。...

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按照正常的思路，一样一样的排除原因。这么小的片度，应该是比好扩的，所以首先排除模板的问题：可以用同样的模板扩增一下其他片段，来排除模板的问题。
第二，排除一下酶的问题：用同样的酶是否能扩增出其他片段？
我觉得PCR条件的可能性不大，引物的可能性也不大。如果是CDNA模板的话，还有一个表达量的问题。
希望有用。

收起

PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物总是扩增不出来,目的片段279bp,我用的条件是94℃,5min；94℃,30s,50℃,30s,72℃,45s,30个循环；72℃,5min.其中退火温度有试过56℃,58℃,都不行,只有引 检测血清的病毒为阴性,PCR确能扩增出目的条带,测序结果也对,是怎么回事? pcr扩增时出现多条带,目的条带很亮,多余的带比目的条带大,是怎么回事 一个引物PCR扩增出的多个条带为什么亮度会不同?用ISSR标记分析遗传多样性,一个引物的PCR扩增结果可以有多个条带,为什么有的条带很亮,有的条带就不太亮? PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么? 小片段DNA（100-200bp）的PCR扩增PCR模板是100bp-200bp的片段,用SSR引物扩增的时候,出现的不是单一的目的带,目的带出现的同时还有许多非特异性扩增条带,有时候就是条带扩不出来,对于小片段模板 基因的PCR扩增实验扩增不出DNA条带是什么原因? PCR扩增不出来条带的原因? 不同基因组用同一引物扩增,条带一样的原因不同基因组用同一引物PCR扩增,其条带是一样的? 请问谁有PCR扩增目的条带 连接 转化的具体步骤呀 细菌基因组DNA 的PCR扩增问题我提取了革兰氏阴性菌的基因组DNA并用几种不同的引物对其进行PCR扩增,意在扩增一段特定的基因片段,其中一对引物扩增出了两条带,一条500bp左右,为目的条带,另 PCR中出现两倍产物大小的条带,怎么回事!经常PCR中会出现两倍目的片段长度的条带,引物特异性也还不错,扩增的模板也是40000bp左右的片段,有时候出现有时候又没了,我想问这类条带是怎样出来 用Pfu酶和Taq在相同条件下进行PCR,结果是Pfu酶能够扩增到目的条带,而Taq酶没有,是为什么呢?提取出的DNA用TE溶解后加了RNase,但是RNase对PCR没有太大的影响啊 如何消除PCR的拖尾PCR扩增出来有目的条带,但是有拖尾,呈弥散片 关于PCR的问题：PCR如果目的基因扩增出来了是不是条带中的引物二聚体就没有了呀? 胶回收：雀式pcr第一对pcr引物扩增后 ,产物电泳得到两条带,那么我该切哪一条啊?怎么知道目的片段的bp?不是目的片段的bp，图片中左边第一条是marker，第五第六条各有两条带，在1000 和1400的 如何增加PCR产物?我得PCR扩增循环数是30个,扩增体系是15微升,其中NTP的浓度是1.5,引物和酶都是1,模板是1.2,镁离子的浓度是1.0.能扩出目的条带,但是琼脂糖电泳条带不是很亮,即目的条带的量不 PCR产物为什么会出现100~200bp的条带我用菌落PCR检测library质粒扩增质量,引物用的是takara的M13正反引物,目的质粒基因长度为~500bp.PCR完后电泳图谱显示~750bp有较明显条带,很奇怪的就是100~200bp有