western 转膜 蛋白总是转不上PVDF膜?有时候还出现花膜跑胶的分子量大小是17kD 恒流转膜,90mA 3H,biorad的电转槽,

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/17 03:08:55
western 转膜 蛋白总是转不上PVDF膜?有时候还出现花膜跑胶的分子量大小是17kD 恒流转膜,90mA 3H,biorad的电转槽,
xV[OG+~J.(@DTUSIp*k/6` xm7Yַ왙}_7!)}9Ιo;CQ~cJװehO8a &@ )x]D8[u "iT(S=Njsf-0ĵ4W/S-rolw}5VSB@W~S7l=#S\}ccf(SG7+߽G%'BnAiHZl7@_ Q22Q@<ۗ;ľ aZQ@zCP( @ݸ& Rϩ k 1`@w?mspEbN 6ROXClx)!ukR`geأd\@q(KL@~{RC}%}C-9#m

western 转膜 蛋白总是转不上PVDF膜?有时候还出现花膜跑胶的分子量大小是17kD 恒流转膜,90mA 3H,biorad的电转槽,
western 转膜 蛋白总是转不上PVDF膜?有时候还出现花膜
跑胶的分子量大小是17kD 恒流转膜,90mA 3H,biorad的电转槽,

western 转膜 蛋白总是转不上PVDF膜?有时候还出现花膜跑胶的分子量大小是17kD 恒流转膜,90mA 3H,biorad的电转槽,
1.甲醛泡膜没有?
2.溶液的温度?建议加冰,放冷室

很多因素都有可能影响到转膜，楼主直接找Biorad的技术员比较快。

影响因素应该有很多；一、首先需确定目的蛋白是否在胶上：跑完电泳可以先考马斯亮蓝染胶，如果在Marker的指示下看到了目的蛋白的清晰条带，基本可以确定蛋白已经在胶上跑开。二、膜的准备：1.根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔径的PVDF膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。通常用0.45μm和0.2μm两种规格的PVDF膜。大于20kD的蛋白可用0.45μm的膜，小于20k...

全部展开

影响因素应该有很多；一、首先需确定目的蛋白是否在胶上：跑完电泳可以先考马斯亮蓝染胶，如果在Marker的指示下看到了目的蛋白的清晰条带，基本可以确定蛋白已经在胶上跑开。二、膜的准备：1.根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔径的PVDF膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。通常用0.45μm和0.2μm两种规格的PVDF膜。大于20kD的蛋白可用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了，如用0.45μm的膜就会发生“Blowthrough”的现象。PVDF膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低分子量蛋白的检测。2.PVDF膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和1-5秒钟，以使表面基团活化，有利蛋白结合。三、三明治做好后放入已经加入转膜液的转膜槽，连接电极，方向是胶负膜正。转膜过程在4度冰箱中或置入冰水浴中进行。四、时间和电压或电流依照分子量大小：分子量越大，时间越长，电压或越大。转移时间一般为1.5 小时，( 1mA-2mA/cm2，10% gel)，可根据分子量大小调整转移时间和电流大小。本人觉得17KD的蛋白可以试试恒压90V40min。仅供参考。

收起

western 转膜 蛋白总是转不上PVDF膜?有时候还出现花膜跑胶的分子量大小是17kD 恒流转膜,90mA 3H,biorad的电转槽, Western Blot（WB）实验最后显色过程中总是没有条带?最近做Western Blot蛋白印迹实验 ,大家推荐下做Western Blot外包的公司,北京的最好,Western Blot的价格 western blot 如何体外获得目的蛋白 WESTERN中蛋白样品怎么提取 做western蛋白浓度太小怎么办? western blot 试验中蛋白转膜总是颜色很浅.分子量是27KD,电流和电压多少合适,应该转多长时间. 植物蛋白提取总是跑不出蛋白, western blot中蛋白样品怎样调节浓度 蛋白定量时western和ELISA哪个好 western blot如何应用于目的蛋白的组织定位 做western blot时,蛋白降解后转膜以后是什么样 western blotting 中为什么要进行蛋白样品的定量? 做Western时如何判断蛋白是否降解? Western-blot实验中,蛋白上样一般多少含量 western blot 实验中组织提取蛋白最小量多少 核蛋白 能用普通蛋白提取方法吗western 蛋白western blot实验需要注意的有些什么 做western bloting 如何确定蛋白样品的体积