作业帮半定量的RT-PCR预实验需要摸索哪些条件?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 12:24:43
半定量的RT-PCR预实验需要摸索哪些条件?
半定量的RT-PCR预实验需要摸索哪些条件?
半定量的RT-PCR预实验需要摸索哪些条件?
模板使用量（要让各样本调到类似的浓度,一般用内参引物调）,扩增循环数（一定不能到平台期）
其实在如今这个商业化如此发达的今天不是必须去摸索反应条件！
逆转录部分也有专门的试剂盒，说明书里面的反应条件都写的很清晰！
PCR部分也有专门的试剂盒，说明书里面的反应条件也写的很清晰！
可能现在最主要的就是引物合成和引物的扩增效率这个需要自己摸索！
不过也有商业化的验证引物，反应温度，反应条件都会给你！比自己合成贵一些！但是用起来比较方便！...
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其实在如今这个商业化如此发达的今天不是必须去摸索反应条件！
逆转录部分也有专门的试剂盒，说明书里面的反应条件都写的很清晰！
PCR部分也有专门的试剂盒，说明书里面的反应条件也写的很清晰！
可能现在最主要的就是引物合成和引物的扩增效率这个需要自己摸索！
不过也有商业化的验证引物，反应温度，反应条件都会给你！比自己合成贵一些！但是用起来比较方便！
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其实在如今这个商业化如此发达的今天不是必须去摸索反应条件！
逆转录部分也有专门的试剂盒，说明书里面的反应条件都写的很清晰！
PCR部分也有专门的试剂盒，说明书里面的反应条件也写的很清晰！
可能现在最主要的就是引物合成和引物的扩增效率这个需要自己摸索！
不过也有商业化的验证引物，反应温度，反应条件都会给你！...
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其实在如今这个商业化如此发达的今天不是必须去摸索反应条件！
逆转录部分也有专门的试剂盒，说明书里面的反应条件都写的很清晰！
PCR部分也有专门的试剂盒，说明书里面的反应条件也写的很清晰！
可能现在最主要的就是引物合成和引物的扩增效率这个需要自己摸索！
不过也有商业化的验证引物，反应温度，反应条件都会给你！
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1、反应的总体系是10ul还是20ul或者50ul需要摸索，一般来说标准的都是20或者25ul的但是效果不好的话可以考虑改变体系换小体系看看
2、你的加样的模板量，模板不是越多越好
3、引物包括引物的最佳退火温度引物的终浓度引物的特异性，一般是设计几对引物梯度PCR选择最佳的引物
4、镁离子浓度
5、酶：酶的量活力都是要考虑的因素
6、反应的循环数，一般来说...
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1、反应的总体系是10ul还是20ul或者50ul需要摸索，一般来说标准的都是20或者25ul的但是效果不好的话可以考虑改变体系换小体系看看
2、你的加样的模板量，模板不是越多越好
3、引物包括引物的最佳退火温度引物的终浓度引物的特异性，一般是设计几对引物梯度PCR选择最佳的引物
4、镁离子浓度
5、酶：酶的量活力都是要考虑的因素
6、反应的循环数，一般来说30-40个循环即可
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模板量，循环数，反应温度，引物序列。