蓝白斑筛选问题!蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 01:54:22
蓝白斑筛选问题!蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么
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蓝白斑筛选问题!蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么
蓝白斑筛选问题!
蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么它也不能降解X-gal,与重组子一样的啊,那么怎么保证筛选到的是重组子呢?难道感受态中没有质粒吗?如果没有制备感受态的步骤中怎么没有提到呢?晕死了!

蓝白斑筛选问题!蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么
在重组质粒表达的实验中,蓝白班筛选是要检测重组质粒是否表达,而氨苄的加入主要是为了防止培养过程中染菌.
对于半乳糖苷酶活性筛选,首先重组质粒所选的质粒与野生型（感受态）不同,上面有多克隆位点,蛋白标签,和多对操纵子、启动子,其中就包括乳糖操纵子.当培养液中加入IPTG,IPTG可以和乳糖操纵子下游的的阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白从DNA上脱离,激活半乳糖苷酶的表达.因而重组质粒可以利用x-gal而感受态不能.这个是蓝白斑筛选的主要原理.结果中白斑表示重组质粒表达的菌体,蓝斑表示未表达.
至于氨苄筛选,通常不会利用氨苄抗性进行筛选,因为感受态中是否有氨苄抗性基因很不确定,无法得到准确的结果.

感受态细胞中应该也有质粒，而且应该也有氨苄抗性标记，这句话不对。感受态细胞中有质粒，但是没有抗性。而作为载体的外源质粒是具有抗性位点的。
产生蓝白斑是针对外源质粒导入了感受态细胞之后而言的（只有导入了外源的质粒，该感受态才具有抗性，能够在含有氨苄的培养基上生存），导入的外源质粒有两种情况，一来是自身连接的，也就是没有插入目的片段，那个时候，编码半乳糖苷酶的基因重新连接到一起，具有活性，在I...

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感受态细胞中应该也有质粒，而且应该也有氨苄抗性标记，这句话不对。感受态细胞中有质粒，但是没有抗性。而作为载体的外源质粒是具有抗性位点的。
产生蓝白斑是针对外源质粒导入了感受态细胞之后而言的（只有导入了外源的质粒，该感受态才具有抗性，能够在含有氨苄的培养基上生存），导入的外源质粒有两种情况，一来是自身连接的，也就是没有插入目的片段，那个时候，编码半乳糖苷酶的基因重新连接到一起，具有活性，在IPTG的诱导下可以利用X-gal产生蓝斑。因此，凡是蓝斑的就代表被导入的是空的载体。
而外源质粒被插入目的片段之后，导致编码半乳糖苷酶的基因失效，无法利用X-gal产生蓝斑，因此菌落呈无色。
纯手打，望采纳，还有不理解，请追问。谢谢~

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蓝白斑筛选 蓝白斑筛选问题!蓝白斑筛选重组子时首先是氨苄筛选,其次是半乳糖苷酶活性筛选.感受态细胞中应该也有质粒,而且应该也有氨苄抗性标记,而且感受态如DH5α的半乳糖苷酶应该是失活的,那么 蓝白斑筛选假阴性为什么蓝白斑筛选会出现假阴性 蓝白斑筛选中的蓝斑是什么?是载体自连产物吗? 蓝白斑筛选培养基怎么配啊?新手 请问IPTG如何配置?AT克隆蓝白斑筛选用 pet28a作载体的重组质粒转入大肠杆菌怎么检测筛选,酶切位点是NdeI和XhoI,可以用氨苄青霉素或蓝白斑筛选?貌似没有抗氨苄青霉素基因啊 蓝白斑筛选 没有白斑我的蓝白斑筛选,做好了,之后为什么只有蓝斑,没有白斑呢?郁闷那您看,我是不是应该把连接体系变一下呢? 蓝白斑筛选实验,结果都是白斑说明所有的细胞都插入基因成功了吗? 外源基因插入puc18载体中导入大肠杆菌受体细胞筛选白斑还是蓝斑 请详述乳糖操纵子正负调控机制,并结合此机制解释基因重组技术中蓝白斑筛选的原理. 做蓝白斑筛选为什么不长菌?最近做蓝白斑筛选时,平板上一点菌落都没有长出来,不知道什么原因.操作过程应该问题不大,已经成功做过很多次.怀疑是感受态的问题,放在-80度保存了二个多月, 关于蓝白斑筛选的遇到的问题我用的是DH5α甘油菌和PUC19做蓝白斑筛选,做了几次实验,（培养基是LB固体培养基,内含氨苄抗生素,等凝固之后在表面涂上X-gal和IPTG,涂好后且在一天内使用,不会久 实时定量PCR.亮氨酸拉链蓝白斑筛选操纵子还有一题简答题.简述原核生物的复制起始过程. 最近做基因克隆,做蓝白斑筛选时只有白斑,一个蓝斑也没有,而且白斑长的非常密,挑斑摇菌PCR电泳检测啥也没有,我是按实验指导上来做的,载体和感受态细胞都是老师给的,应该没什么问题,请 为什么蓝白斑提取出的质粒做琼脂糖电泳白斑跑得快?第一个为蓝斑,以后全是白斑所提质粒 蓝白筛选原理? 一学生用蓝白斑做阳性克隆筛选,因为疏忽没有在选择性培养基中添加X-gal,结果长出的菌斑全为白色试问：（1）这些白斑是否全为阳性克隆,形成白斑的原理是什么?（2）如果不是,如何从这些