pcr技术最关键的地方、?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/12 02:56:56
![pcr技术最关键的地方、?](/uploads/image/z/10263854-38-4.jpg?t=pcr%E6%8A%80%E6%9C%AF%E6%9C%80%E5%85%B3%E9%94%AE%E7%9A%84%E5%9C%B0%E6%96%B9%E3%80%81%3F)
xTnP@tTꦍ(?d_`x("@DiV16ܹUsHm6\3gf;NF-ZEaXcXTq<=hY_j\pG<ΞRM4P>ڇmugHnvP_]j
ɖ9:*X,Jmy8NmjভF=gizΈ$]@-GN]VP,$Azwrpճc[8 D>!CF_,ˍ'PF[oE&yW#$rz
5wkk%mqbädoKKz$}5V,F`ܵz!Xmj#"nhY
;e1R&n4Va~A]:]\rJjݔܘn&Bu+d^Ux髡Ο:F
pcr技术最关键的地方、?
pcr技术最关键的地方、?
pcr技术最关键的地方、?
酶、
引物
酶、
引物
引物现在设计都是靠软件的,输入上下游各超过你目的片段的500bp以上,打分值一般都会很好的,选择一下最适合的,一般TM值大于55度不超过60度。但是我认为PCR关键是批出特异的基因条带,首先要保证样品没有基因组污染,因为我们是靠RNA逆转录成cDNA扩增的,因此如果有基因组污染的话,对后续的测序,表达量的观察都有很大的影响。但是我们要是设计跨内含子的引物,就可以避免基因组污染的扩增物。另外如果片段...
全部展开
引物现在设计都是靠软件的,输入上下游各超过你目的片段的500bp以上,打分值一般都会很好的,选择一下最适合的,一般TM值大于55度不超过60度。但是我认为PCR关键是批出特异的基因条带,首先要保证样品没有基因组污染,因为我们是靠RNA逆转录成cDNA扩增的,因此如果有基因组污染的话,对后续的测序,表达量的观察都有很大的影响。但是我们要是设计跨内含子的引物,就可以避免基因组污染的扩增物。另外如果片段过长,或是要拿到基因全长的扩增一般都很难,因为在非翻译区的扩增,CG含量都很高,可以试着用巢式PCR,超过1000bp的尽量用LATaq酶,因为要保证碱基准确,为了后续测序实验做准备。
收起