作业帮细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,用什么方法计,如何操作呢
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 23:28:57
细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,用什么方法计,如何操作呢
细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,用什么方法计,如何操作呢
细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,用什么方法计,如何操作呢
用血球计数板计数
操作步骤：
1.视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍）,以每小格的菌数可数为度. 2．取洁净的血球计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片.
3．将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一 小滴（不宜过多）,让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液.也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高）,然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）.
4．静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移.将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数.由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度.
5．计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数.如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）.为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定.如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差.即位于本格上线和左线上的细胞计入本格,本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中.见右图：即本格中计数细胞为3个.
6．对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算.每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大,否则应重新操作）,按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量.
7．测数完毕,取下盖玻片,用水将血球计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度.洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存.
计算方法（酵母为例）：
(1)16格×25格的血球计数板计算公式：
酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×10四次方×稀释倍数
(2)25格x16格的血球计数板计算公式:
酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数