PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数在55和50度只看到引物二聚体且有拖尾现象,没有目的条带

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/20 04:26:00
PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数在55和50度只看到引物二聚体且有拖尾现象,没有目的条带
xTnV|S)ԋԧV?Hf":U_ ! H CLmI@S~¨yèd |e^\{L˟+oyzY׊d8W?1bE{S+z7̹ yC>IG"q*ꬢ{GYNι+6E5FqVhSyGf˫֖AhuP{mީ+̿410 i-n()<-2 rδmCr.{[W$$HKt6B)(fU'_@"C'뽌">Q63.H9Y z]Ʀ&,5Lj\ǝTY&rѣOA26ߡ0-O,wT~z CFc:-<p("tF#4كDd i:Mj걧2q(:Yoμi;ShoRڂPk|]W>ef [BLe:Q^6yO#2L֕ECmoMwj.q!Z7m\1Ll?_j\,YvB:*E9#Y|^XYt oo2ҺX'RbjwJRzX2qaA,-}7oeքb> b9-XE[̤[]"ɴ +XܾgW°U>B/MF_Suܗ$

PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数在55和50度只看到引物二聚体且有拖尾现象,没有目的条带
PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数
在55和50度只看到引物二聚体且有拖尾现象,没有目的条带

PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数在55和50度只看到引物二聚体且有拖尾现象,没有目的条带
首先,要确定引物设计成功了啊.
其次,确定试剂都是好的.
再次,确定模板DNA是没有降解太厉害.
还有就是PCR房间温度要控制在室温状态.
像这种夏天要要保持在25--30度室温.
以上都确定了之后,我建议你设计一下touchdown程序（每个循环降0.5度,这个具体程序你去查查,既可以减少非特异扩增,而且不用摸退火温度条件）.
你还可以摸摸温度梯度咯.这个程序就是那个Gradient选项（前提你的PCR仪是可以做温度梯度的PCR）.
如果所有的温度梯度都扩增不出来,我就倾向于是你的引物设计不好了.
一般退火温度越高,越不容易出现非特异,它对引物和模板的匹配要求很高.如果扩增不出来,可以考虑降低退火温度,这样虽然容易出现非特异片段,但是目的片段也相应容易扩增出来.

很大的可能是你模板的问题。你再重新提一次。然后55 57 60 62各做几次，循环数比你现在的循环数再多10左右。 试试看。
实验就是靠一边做，一边分析的。

我最近也在扩增霉菌的18SrDNA,其大小为1600左右的片段，很你的情况一样，没有目的片段，只是在100bpMarker处有不清晰的条带，师兄说是引物二聚体，后来我更换了试剂也试了很多次，还那样，后来我重新合成了引物，结果一下子就出来了，你也可以试试，合成引物也不贵，我合成的才60几块钱，...

全部展开

我最近也在扩增霉菌的18SrDNA,其大小为1600左右的片段，很你的情况一样，没有目的片段，只是在100bpMarker处有不清晰的条带，师兄说是引物二聚体，后来我更换了试剂也试了很多次，还那样，后来我重新合成了引物，结果一下子就出来了，你也可以试试，合成引物也不贵，我合成的才60几块钱，

收起

细菌基因组DNA 的PCR扩增问题我提取了革兰氏阴性菌的基因组DNA并用几种不同的引物对其进行PCR扩增,意在扩增一段特定的基因片段,其中一对引物扩增出了两条带,一条500bp左右,为目的条带,另 PCR扩增1829BP的片段,一对引物的Tm都是64度,退火温度已经试过55和50度都没有目的条带,请教pcr设置参数在55和50度只看到引物二聚体且有拖尾现象,没有目的条带 胶回收：雀式pcr第一对pcr引物扩增后 ,产物电泳得到两条带,那么我该切哪一条啊?怎么知道目的片段的bp?不是目的片段的bp，图片中左边第一条是marker，第五第六条各有两条带，在1000 和1400的 小片段DNA（100-200bp）的PCR扩增PCR模板是100bp-200bp的片段,用SSR引物扩增的时候,出现的不是单一的目的带,目的带出现的同时还有许多非特异性扩增条带,有时候就是条带扩不出来,对于小片段模板 PCR的扩增基因的引物是什么 一般说,PCR 扩增产物片段长度 包不包括引物在内?荧光定量PCR扩增长度一般为80到150 ,我想知道包不包括引物的长度? PCR扩增DNA片段为什么第三次才会出现引物对的配对 PCR在扩增长片段的设计引物时需要注意什么? PCR在扩增长片段的设计引物时需要注意什么? 利用PCR技术进行DNA扩增时需要加入一对碱基互补的引物 为什么错? 我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 PCR扩增 正向引物,反向引物是什么?怎么结合的? 16S RDNA作为通用引物,用于细菌总DNA 提取后跑PCR,扩增出的片段是多少个bp呢?我的引物是 F: 5'-CAGCTCGTGTCGTGAGATGT-3' R: 5'-CGTAAGGGCCATGATGACTT-3 关于PCR引物问题请问为什么PCR后扩增的片段都是相同的长度?引物的延伸到的什么时候会停止呢? PCR中,PCV2的引物扩增后,跑电泳的条带在多少bp?大概是822bp吧~以保守区制做引物，扩增的条带有多少bp?需要非常具体的数字。 谁能通俗易懂的给我解释一下PCR反应过程中,引物与模板如何结合?扩增出来的是上下游引物之间的片段呢?还是就是引物片段?最终目的不是扩增目的基因,观察多态性的. PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在100-120BP长度,那该如何.模板比理论上要扩出来的目的片段长度还短,怎么解决 反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,这是为什么呢?Oligo(dT)反转录,目的片段2700bp,引物二聚体小于100bp