怎样确定一个基因是否被敲出
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/08/26 10:39:45
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怎样确定一个基因是否被敲出
怎样确定一个基因是否被敲出
怎样确定一个基因是否被敲出
很简单,直接以靶基因的敲除位点为模板做PCR,如果是阴性,就是敲除成功.或者是提RNA后做RT-PCR.由于基因敲除往往不是敲除的整段基因,所以引物设计的时候要针对敲除的那个部位.
楼上说的只能表明外源基因的进入,但不能证明目的基因已经被去掉了.
看你用什么生物载体做了,方法不一而足。给你举个细菌的例子,一般会用一种抗药选择基因替代在原敲除基因的位置,这样,只要经过基因敲除的细菌,都会带有抗药性,可以再选择平板生长。在其他生物中,我们还可以用荧光基因等代替敲除基因等进行筛选,反正原理基本如此方法有很多。
请问楼上,基因敲除你不做筛选怎么培养?...
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看你用什么生物载体做了,方法不一而足。给你举个细菌的例子,一般会用一种抗药选择基因替代在原敲除基因的位置,这样,只要经过基因敲除的细菌,都会带有抗药性,可以再选择平板生长。在其他生物中,我们还可以用荧光基因等代替敲除基因等进行筛选,反正原理基本如此方法有很多。
请问楼上,基因敲除你不做筛选怎么培养?
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可以从基因组、表达、蛋白水平分别检测:
1:以启动子或者标记基因为探针做southern 杂交。(PCR也可以,但不够准确)
2:以野生型(或者转基因阴性)为对照,检测该基因的表达量是否降低。(RT-PCR、realtimePCR、northern blotting)
3:合成该基因的抗体,以野生型为对照做western检测。...
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可以从基因组、表达、蛋白水平分别检测:
1:以启动子或者标记基因为探针做southern 杂交。(PCR也可以,但不够准确)
2:以野生型(或者转基因阴性)为对照,检测该基因的表达量是否降低。(RT-PCR、realtimePCR、northern blotting)
3:合成该基因的抗体,以野生型为对照做western检测。
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