电色谱保留机理

电色谱保留机理
电色谱保留机理

电色谱保留机理
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此外,不知道楼主所说的电色谱是否指的就是高效毛细管电泳啊?
以下是一些资源,希望对您有所帮助：
色谱图书库（电子版）
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20090812/2055222/
毛细管电泳的模式及应用
http://www.instrument.com.cn/search/BBSArchive_318197_1.htm
CEC应用文章选集
http://www.instrument.com.cn/download/shtml/024291.shtml
高效毛细管电泳的基本原理
高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis,HPCE）是近年来发展起来的分离、分析技术,它是凝胶电泳技术的发展,是高效液相色谱分析的补充.该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等.可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等,HPLC分析高效、快速、微量.
电泳迁移
不同分子所带电荷性质、多少不同,形状、大小各异.一定电解质及PH的缓冲液或其它溶液内,受电场作用,样本中各组分按一定速度迁移,从而形成电泳.
电泳迁移速度(v)可用下式表示：
其中E为电场强度(E＝V/L,V为电压,L为毛细管总长度).u为电泳淌度.
电渗迁移
电渗迁移指在电场作用下溶液相对于带电管壁移动的现象.特殊结构的熔合硅毛细管管壁通常在水溶液中带负电荷,在电压作用下溶液整体向负极移动,形成电渗流.带电微粒在毛细管内实际移动的速度为电泳流和电渗流的矢量和.分析化学博客-jl2~d d&
6}8eE4B3q5T I5U0 分离分析类型
\3B[D hv,m cF2Z0 根据其分离样本的原理设计不同主要分为以下几种类型：
\5b[ _0]&uL+\$C0①毛细管区带电泳（capillaryzoneelectrophoresis,CZE）；②毛细管等速电泳（capillary chromatography,CITP）；
③毛细管胶速电动色谱（miceller electrokinetic capillary chromatography,MECC）；
④毛细管凝胶电泳（capillary gelelectrophoresis,CGE）；
⑤毛细管等电聚焦（capillary isoelectric focusing ,CIEF）.
毛细管区带电泳（CZE）为HPCE的基本操作模式,一般采用磷酸盐或硼酸盐缓冲液,实验条件包括缓冲液浓度、pH值、电压、温度、改性剂（乙腈、甲醇等）,用于对带电物质（药物、蛋白质、肽类等）分离分析,对于中性物质无法实现分离.毛细管胶束电动色谱（MECC）为一种基于胶束增溶和电动迁移的新型液体色谱,在缓冲液中加入离子型表面活性剂作为胶束剂,利用溶质分子在水相和胶束相分配的差异进行分离,拓宽了CZE的应用范围,适合于中性物质的分离,亦可区别手性化合物,可用于氨基酸、肽类、小分子物质、手性物质、药物样品及体液样品的分析.毛细管等速电泳（CITP）采用先导电解质和后继电解质,构成不连续缓冲体系,基于溶质的电泳淌度差异进行分离,常用于离子型物质（如有机酸）,并因适用较大内径的毛细管而可用于微制备,但本法空间分辨率较差.毛细管等电聚焦电泳（CIEF）用于具兼性离子的样品（蛋白质、肽类）,等电点仅差0.001可分离的物质.毛细管凝胶电泳（CGE）依据大分子物质的分子量大小进行分离,主要用于蛋白质、核苷酸片段的分离.此外,还有毛细管电色谱（CEC）及非水毛细管电泳（CNACE）,用于水溶性差的物质和水中难进行反应的分析研究.CZE和MECC用得较多,本文以两种方法为例来说明HPLC的原理.
CZE的基本原理
HPLC选用的毛细管一般内径约为50μm（20～200μm）,外径为375μm,有效长度为50cm（7～100cm）.毛细管两端分别浸入两分开的缓冲液中,同时两缓冲液中分别插入连有高压电源的电极,该电压使得分析样品沿毛细管迁移,当分离样品通过检测器时,可对样品进行分析处理.HPLC进样一般采用电动力学进样（低电压）或流体力学进样（压力或抽吸）两种方式.在毛细管电泳系统中,带电溶质在电场作用下发生定向迁移,其表观迁移速度是溶质迁移速度与溶液电渗流速度的矢量和.所谓电渗是指在高电压作用下,双电层中的水合阴离子引起流体整体地朝负极方向移动的现象；电泳是指在电解质溶液中,带电粒子在电场作用下,以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移的现象.溶质的迁移速度由其所带电荷数和分子量大小决定,另外还受缓冲液的组成、性质、pH值等多种因素影响.带正电荷的组份沿毛细管壁形成有机双层向负极移动,带负电荷的组分被分配至毛细管近中区域,在电场作用下向正极移动.与此同时,缓冲液的电渗流向负极移动,其作用超过电泳,最终导致带正电荷、中性电荷、负电荷的组份依次通过检测器.
MECC的基本原理
MECC是在CZE基础上使用表面活性剂来充当胶束相,以胶束增溶作为分配原理,溶质在水相、胶束相中的分配系数不同,在电场作用下,毛细管中溶液的电渗流和胶束的电泳,使胶束和水相有不同的迁移速度,同时待分离物质在水相和胶束相中被多次分配,在电渗流和这种分配过程的双重作用下得以分离.MECC是电泳技术与色谱法的结合,适合同时分离分析中性和带电的样品分子. 毛细管电泳技术可检测多种样品,如血清、血浆、尿样、脑脊液、红细胞、体液或组织及其实验动物活体实验；且可分离分析多种组分,如核酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小的生物活性分子等的快速分析,以及DNA序列分析和DNA合成中产物纯度测定等,甚至可用于碱性药物分子及其代谢产物、无机及有机离子/有机酸、单细胞分析、药物与细胞的相互作用和病毒的分析,如在缓冲液中加入表面活性剂则可用于手性分离中性化合物.
I |o"u5v4TP(e0 毛细管电泳技术不仅在基础科学中得到广泛应用,在临床医学等领域的应用也有较多应用.如临床疾病诊断、临床蛋白分析、临床药物监测、代谢研究、病理研究、同工酶分析、PCR产物分析、DNA片段及序列分析等.随着人类基因组计划的实施,人类基因组计划的完成比预期时间一再提前,其主要工具是毛细管电泳仪.但是人类基因组图谱并没有告诉我们所有基因的“身份”以及它们所编码的蛋白质.人体内真正发挥作用的是蛋白质,蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色,其中可能藏着开发疾病诊断方法和新药的“钥匙”.“后基因时代”,一个以“蛋白质组”为重点的生命科学的新时代到来,需要对蛋白质更多的研究,毛细管电泳技术将发挥更大的作用.在医学研究中毛细管电泳技术越来越受到重视,但其临床应用尚属起步阶段,随着毛细管电泳技术的不断发展和完善,CE将在临床研究和基础研究领域发挥更重要的作用.