关于PCR退火温度和聚丙烯酰胺凝胶电泳条件调整请看图：希望1条带和2条带的差异明显些,好看容易读些,还有2条带和3条带的差异也明显些,跑的清楚些.如何改变退火温度降低还是升高?是否需

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/07/29 18:40:27
关于PCR退火温度和聚丙烯酰胺凝胶电泳条件调整请看图：希望1条带和2条带的差异明显些,好看容易读些,还有2条带和3条带的差异也明显些,跑的清楚些.如何改变退火温度降低还是升高?是否需
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关于PCR退火温度和聚丙烯酰胺凝胶电泳条件调整
请看图：希望1条带和2条带的差异明显些,好看容易读些,还有2条带和3条带的差异也明显些,跑的清楚些.
如何改变退火温度降低还是升高?是否需要改变模板浓度或者是增大PCR循环数目?我用的7.5微升体系PCR.
变性后用聚丙烯酰胺凝胶电泳跑胶,实际功率为：1500V,100毫安,55瓦.
时间是不是跑的再长一点
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你是想让1,2条带分得开一些,还是想让他们看起来清晰一些?
要是想让1,2条带分得开一些,就是在制胶时配制高浓度的琼脂糖胶,比如我们平时用1%的,你可以配成1.5%或2%的,然后在跑胶时选择低电压长时间跑,80-100v稳压.
如果你要是想让条带清晰些,可以做个梯度PCR摸一下最适Tm值,同时可以适当增加一两个循环数,也可以延长一下变性和退火时间

你应该做一个梯度PCR看看结果，哪个温度最适合，一般来说提高温度可以更加特异性扩增，你电泳的电压用120V吧，跑的时间再长一点，还有你显色的结果也不好，显色的时间稍微长点更好

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