作业帮限制性内切酶酶解中通常遇见什么问题
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/27 05:26:53
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限制性内切酶酶解中通常遇见什么问题
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限制性内切酶酶解中通常遇见什么问题
(1)DNA完全没有被内切酶切割,由分析知,可能存在的原因有：内切酶失活,DNA不纯,含有SDS、酚、EDTA等内切酶抑制因子；条件不足,DNA酶切位点上的碱基被甲基化；DNA酶切位点上没有甲基化,DNA位点上存在其他修饰,DNA不存在该酶识别序列.
（2）DNA切割不完全,可能存在的原因有：内切酶活力下降,内切酶稀释不正确,DNA不纯,反应条件不佳；内切酶识别的DNA位点上的碱基被甲基化或存在其他修饰,部分DNA黏在管壁上,内切酶溶液粘度大,取样不准,酶切后DNA粘性末端退火；由于反应溶液温度、强烈震荡使内切酶变形；过度稀释使酶活性下降
（3）DNA片段数目多于理论值.可能原因：内切酶星状活力减少,其他内切酶污染
（4）酶切后没有观察到DNA片段存在.DNA定位错误,在酶切反应液中形成非特异的沉淀
(5)内切酶保存期内快速失活,保存温度不适,以稀释形式保存,贮藏缓冲液不适当,低蛋白浓度等
（6）电泳后DNA片段的带型弥散不匀,DNA上结合有蛋白质,内切酶中含有DNA外切酶
没切出来或星活性