叙述结核杆菌的检验程序希望大家能把答案写的易懂简短.不是长篇大论

叙述结核杆菌的检验程序希望大家能把答案写的易懂简短.不是长篇大论
叙述结核杆菌的检验程序
希望大家能把答案写的易懂简短.不是长篇大论

叙述结核杆菌的检验程序希望大家能把答案写的易懂简短.不是长篇大论
结核杆菌与麻风杆菌是分枝杆菌属中的主要病原菌.
结核杆菌菌体细长略带弯曲,有分枝生长趋势.菌体含脂量高,与其抗酸特性、抵抗力特性、致病性与免疫性等都有密切关系.该菌营养要求高,生长缓慢,形成“菜花状”菌落.

一、结核杆菌检验程序
结核病人病灶中查到结核杆菌,是病原学诊断的重要依据,根据感染部位不同,可采集病人的痰、尿、粪便、脑脊液、胸腹水、胃液等,按以下程序进行检验.

二、结核杆菌培养特性
1. 液体培养基（苏通氏培养基、小川培养基、血清酸性培养基等）结核杆菌生长表现：标本材料经前处理（即酸碱处理,可液化标本,也可杀死杂菌,还可浓缩集菌）后接种液体培养基,35℃培养1-2周,由于表面生物,可在培养基表面表成污灰、干燥、有皱褶的菌膜.
2. 固体培养基（改良罗氏培养基、丙酮酸钠培养基等）结核杆菌生长表现：标本材料经前处理后,接种固体培养基,37℃培养2-4周,在培养基表面可形成乳白或米黄色、不透明、粗糙颗粒状或节状堆聚的菌落,呈现“菜花状”.
3. 结核杆菌快速培养检测方法：无菌手续将前处理后的材料涂片,置液体培养基中,35℃恒温箱CO2培养箱内培养,3-5日后,每隔日取出一玻片,染色镜检,可快速获得结果.

三、齐~尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法
【原理】
结核杆菌对苯胺染料不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒精处理也不易脱色,再经美兰复染,结核杆菌及其他分枝杆菌仍呈红色,而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色.
【材料】
1. 结核病人痰液：采取清晨第一口粘痰,或浓缩集落菌法处理过的痰标本.
2. 抗酸染色液
3. 载物玻片、玻片夹、酒精灯、腊笔等.
【方法】
1. 无菌手续采取痰液涂片,自然干燥,火焰固定.
2. 用腊笔将涂面局部隔开,滴加石炭酸复红染液,酒精灯上加热至出现蒸气.切勿沸腾,亦不可使染液干涸.如有干涸的趋势,应及时补加染液.持续染色5-8分钟,待冷后流水漂去多余的染液.
3. 用3%盐酸酒精清脱色,脱至涂面无色为止,约1-3分钟,自来水冲洗.
4. 滴加吕氏美兰染液复杂30秒~1分钟,水洗.自然干燥或吸干后油镜检查.
【结果】
1. 结核杆菌呈现细长,略有弯曲的红色菌体,有的可表现出分枝特征,有的菌体表现有多数浓染颗粒.结核杆菌大多分散排列,亦可以见到有纵行条索状排列.
2. 涂片染色能查到结核杆菌者,一般需要每毫升痰液内含菌量至少应有500个以上,甚至需达到5万以上.故材料多进行浓缩集菌处理,以提高检出阳性率,也造成在染色标本片观察中,不一定每个视野都能看到结核杆菌.
3. 结核杆菌易发生变异,在陈旧培养基或临床治疗后标本材料中,结核杆菌往往菌体断裂,或形成非抗酸性革兰氏阳性的短杆状、球状颗粒,亦称Much颗粒.
4. 标本已经高压灭菌处理,不影响染色结果,也保证操作者的安全.

四、荧光染色法
此系用金胺荧光素染扩酸性细菌的方法,简便易行,但不具特异性.金胺染色法有多种、现列于后表,可选择使用,应用荧光显微镜检查结果.

五、结核杆菌毒力试验——动物试验法

【材料】
1. 动物：体重200~250克豚鼠2只
2. 结核杆菌培养物或结核病人检验材料（痰、尿、粪、腹水等材料经浓缩集菌）
3. 注射器及消毒用材料等.
【方法】
1. 选取结核菌素试验为阴性的豚鼠两只.
2. 吸取结核杆菌悬液或病人检材,注入豚鼠腹股沟皮下0.1ml
3. 注射后每周定期检查一次,观察豚鼠腹股沟淋巴结是否肿大,局部变硬,化脓及体重减轻、体温升高等症状.
4. 给豚鼠作结核菌素试验,是否出现阳性结果.
5. 6周后,将豚鼠进行解剖,观察淋巴结是否肿大,有无干酪性病变,肝、脾、肺等是否肿大,表面有无灰白色结节病灶,取可疑病灶进行涂片染色镜检和分离培养.若为阳性结果,可报告“动物接种后××天查到有结核菌感染”.如无症状及病变者,可报告为阴性.

六、结核杆菌浓缩集菌法（以处理痰标本为例）
【材料】
结核病人24小时痰液,细口瓶,0.02%酚红液、汽油,NaOH,无菌生理盐水等.
【方法】
(一)漂浮法：
1. 取24小时痰液15毫升,装入细口瓶内,加入2倍量0.5%NaOH摇匀,高压灭菌或煮沸20—30分钟杀菌.
2. 待冷后加入汽油2毫升（二甲苯也可以）,用力振荡20—30分钟,用生理盐水加至液面与瓶口齐,静置半小时.
3. 取瓶口表面油状物涂于载物玻片上,微微加热,干后再加,如此重复5—6次,至厚度适宜,烘干待冷,抗酸染色,油镜头检查.

(二)沉淀法：
1. 取痰液1份或2倍量4%NaOH,高压无菌或煮沸20—30分钟后,加入0.02%酚红指示剂0.1毫升,剧烈振荡混匀,亦可置37℃水浴消化30分钟.
2. 矫正PH为7.0,3000转/分离心30分钟,弃去上清液.
3. 取沉淀物涂片染色镜检.若进行分离培养和动物接种,可免去高压灭菌或煮沸的程序.

附录：抗酸染液的配制
1. 石炭酸复红液：称取碱性复红4克,溶于95%酒精100毫升中成饱和液.再取饱和液10毫升与5%石炭酸溶液90毫升混匀即成.
2. 3%盐酸酒精：取浓盐酸3毫升,95%酒 97毫升混合.
3. 吕弗勒氏碱性美兰液：称取美兰2克,溶于95%酒精100毫升中,配成饱和液,取饱和液30毫升,再加入蒸馏水100毫升及10%氢氧化钾水溶液0.1毫升即成.