流式细胞术本实验室有bdC6,我想做TH1/TH2检测,用IFN-γ-FITC,IL-4-eFluor660,CD3-PE,CD8-PE-Cy7.

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/28 17:39:32
流式细胞术本实验室有bdC6,我想做TH1/TH2检测,用IFN-γ-FITC,IL-4-eFluor660,CD3-PE,CD8-PE-Cy7.
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流式细胞术本实验室有bdC6,我想做TH1/TH2检测,用IFN-γ-FITC,IL-4-eFluor660,CD3-PE,CD8-PE-Cy7.
流式细胞术
本实验室有bdC6,我想做TH1/TH2检测,用IFN-γ-FITC,IL-4-eFluor660,CD3-PE,CD8-PE-Cy7.

流式细胞术本实验室有bdC6,我想做TH1/TH2检测,用IFN-γ-FITC,IL-4-eFluor660,CD3-PE,CD8-PE-Cy7.
童鞋你这是个100分问题啊亲.


BD Accuri C6 我没有用过,我找到的laser和filter信息如下,假定你用的是标准配置（红框内）

你挑选的4个荧光已经分布到4个不同的通道,貌似可以共染色然后同时读取.具体有一些特别注意的地方分析如下：
1.efluor660的发射光谱同670LP filter的波段有严重重叠但是因为FL3和FL4由不同laser激发,我认为不会造成问题.
2.FITC与PE-Cy7都会有信号泄露到FL2 PE的通道.FITC与PE的共染色是常见的,compensation必做,可以解决问题.但考虑到它们全用同一个laser,这里PE激发效率本来也只有50-60%,PE-Cy7又是一个效率不高的tandem dye,恐怕会泄露过来很多PE信号.这种情况下,我真的不知道能否靠compensation来解决问题.


建议是楼主只做PE与PE-Cy7的双染色预实验（需要空白及两种单染色对照）,测试compensation的效果.如果没问题可以实施原本实验计划.
当然,如果楼主抗体还没有买好,还能改荧光,我建议买CD8-PerCP,直接不用做PE对它的compensation了啊啊啊啊啊.
以上是个人在理论上的理解,实际经验并不太多,欢迎网友指正.

以上光谱来自于ebioscience FluorPlan Spectra Viewer.

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