在做PCR实验时为什么总是P不出条带?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/07 14:23:45
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在做PCR实验时为什么总是P不出条带?
在做PCR实验时为什么总是P不出条带?
在做PCR实验时为什么总是P不出条带?
普通PCR的话有很多影响因素.比如说酶,退火温度,引物设计,变性温度等很多问题.首先说你的模板是不是很复杂,需不需要加入额外的GC enhancer,或者提高预变性的温度.在者,你的退火温度是否合适,一般会选择引物Tm值-5度左右,不行的话可以做一个梯度PCR.然后不你的酶是不是合适,长片段的要长片段的酶,高保真时要保真度高的酶,而Taq酶就很容易做出来了.
情况比较复杂,你得确认1.你的RNA没问题,没有被降解,cDNA合成没问题。可以用该材料的actin引物做PCR检测试试。2你P的基因如果是已知序列,那么设计引物应该很简单,如果是未知的,那么兼并引物没P出东西来是有可能的。若是根据已知序列设计的引物而没有P出产物那就是你PCR体系或者Tm有问题了,试试TOUCHDOWN程序。若是兼并引物,采用touchdown程序,没有P出来的话,要么是引物不行...
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情况比较复杂,你得确认1.你的RNA没问题,没有被降解,cDNA合成没问题。可以用该材料的actin引物做PCR检测试试。2你P的基因如果是已知序列,那么设计引物应该很简单,如果是未知的,那么兼并引物没P出东西来是有可能的。若是根据已知序列设计的引物而没有P出产物那就是你PCR体系或者Tm有问题了,试试TOUCHDOWN程序。若是兼并引物,采用touchdown程序,没有P出来的话,要么是引物不行,要么是你的材料取材时间不对,你要扩增的基因没有表达出来。问题比较多,一个一个排除,确保你实验的科学性。祝实验成功。
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