有目的基因,293t细胞,如何用慢病毒载体整合入293t细胞,

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/12/02 03:13:52
有目的基因,293t细胞,如何用慢病毒载体整合入293t细胞,
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慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例)：
第一天：
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天：\x09\x09\x09
1.转染293FT细胞.
1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2.500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3.5min后,将,溶液混合,室温静止30min\x09
4.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.
2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+
10%FBS（从此刻开始算时间）.
第三天：
3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上
第四天：
4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4.感染细胞：用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.
第五天：
5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.
6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.

psPXA2是可以表达慢病毒的外壳质粒，其表达产物可以通过粘附机制更易穿过细胞膜。
PMD2.5G为慢病毒的膜蛋白质粒。
pWPXLd为慢病毒载体（个人理解）。

有目的基因,293t细胞,如何用慢病毒载体整合入293t细胞, 如何用标记基因筛选含有目的基因的细胞 大家好,我现在做细胞实验开始需要构建目的基因的过表达,不知道应该选用慢病毒载体还是腺病毒载体,标书 目的基因导入受体细胞是借助于细菌或病毒侵染细胞的途径. 标记基因和目的基因是连在一起的吗?如何用标记基因筛选目的基因载体? 慢病毒细胞稳定株能冻存么? 病毒作为载体是如何携带目的基因进入受体细胞? 将目的基因导入动物细胞用到的载体只能是病毒吗?质粒可以吗? 目的基因导入动植物细胞为什么只能用动植物病毒,而不能用质粒? 病毒基因性细胞是什么意思? 腺相关病毒载体携带目的基因转染细胞,目的基因整合到宿主细胞DNA上,为什么可以持续表达? 将目的基因导入受体细胞中有什么方法? 基因工程中载体、目的基因、受体细胞有什么区别? 慢病毒细胞表达克隆是什么意思 讨论：如何用RNAi技术研究肿瘤细胞中的基因A与肿瘤细胞成瘤性的关系? 慢病毒转染系统和逆转录病毒转染系统在转染T细胞的过程中操作有什么不同?有什么注意事项啊?为什么我做的转染效率连5%都达不到? 在基因工程中,用什么种类病毒能把目的基因导入动物细胞?这种病毒在这个过程中能否繁殖? 人工改变基因是基因重组还是基因突变?1、将目的基因导入受体细胞后,其染色体中是否有目的基因的等位基因?2、在一段基因【如aabbcc】中插入另一个基因【变成aaddbbcc】,这段基因会改变吗?