如何理解DNA连接酶的作用特点

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/19 20:47:05
如何理解DNA连接酶的作用特点
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教科书的观点：DNA连接酶无特异性,其催化dna片段末端连接的情况分两种：(1)催化相同或互补的黏性末端连接;(2)催化同一种限制酶切割产生的平末端连接.两种情况下,末端的“拼接”都会形成“回文序列”.
然而,在基因工程的实际操作中,催化DNA片段末端连接的方法是非常灵活的.例如,当目的序列和载体上没有相同的
限制性内切酶
位点可供利用时,而用不同的限制性内切酶切割后的黏性末端不能互补结合,则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端,再用T4DNA连接酶连接,但平末端连接要比黏性末端连接的效率低得多.由此可见,DNA连接酶可以催化两种不同限制酶切割产生的平末端连接,而两个平末端拼接后,并不是“回文序列”.结论：DNA连接酶催化两个末端连接形成的新序列并不都是“回文序列”.(注：回文序列双链DNA分子中一段旋转对称的核苷酸序列,即以对称轴为轴心旋转180°后呈对称状态,它是大多数限制性内切酶的识别位点.《中国百科大辞典》)
在构建基因表达载体时,最简单的重组方式就是在目的基因DNA的两端用两种不同的限制性酶进行酶切,产生两个不同的黏性末端.再用这两种限制酶对合适的载体进行酶切,也产生两个不同的粘性末端.酶切后的目的基因和载体,由于它们各自的两个末端不同,都不会发生自身环化.

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