启动子PCR拟南芥耐盐基因启动子克隆PCR,用pfu酶,TM值为49,用49,51,53都扩不出来,有何原因?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/10/05 23:09:58
启动子PCR拟南芥耐盐基因启动子克隆PCR,用pfu酶,TM值为49,用49,51,53都扩不出来,有何原因?
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启动子PCR拟南芥耐盐基因启动子克隆PCR,用pfu酶,TM值为49,用49,51,53都扩不出来,有何原因?
启动子PCR
拟南芥耐盐基因启动子克隆PCR,用pfu酶,TM值为49,用49,51,53都扩不出来,有何原因?

启动子PCR拟南芥耐盐基因启动子克隆PCR,用pfu酶,TM值为49,用49,51,53都扩不出来,有何原因?
1 按照教科书上的要求,PCR的退火温度应该为TM-5度,不过有时稍高点也可以,不过你得温度明显过高!试试降低温度.
引物的TM 值太低了,最好重新设计引物,将TM值稍微高点,不然在以genome这样的复杂模板中很易非特异扩增.
2 可能你扩的片段过长,可以用重组PCR,先分成两段扩,再变性后放在一起退火,再扩一轮!