PCR中出现两倍产物大小的条带,怎么回事!经常PCR中会出现两倍目的片段长度的条带,引物特异性也还不错,扩增的模板也是40000bp左右的片段,有时候出现有时候又没了,我想问这类条带是怎样出来
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/10 20:21:45
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PCR中出现两倍产物大小的条带,怎么回事!经常PCR中会出现两倍目的片段长度的条带,引物特异性也还不错,扩增的模板也是40000bp左右的片段,有时候出现有时候又没了,我想问这类条带是怎样出来
PCR中出现两倍产物大小的条带,怎么回事!
经常PCR中会出现两倍目的片段长度的条带,引物特异性也还不错,扩增的模板也是40000bp左右的片段,有时候出现有时候又没了,我想问这类条带是怎样出来的?
不是只有1对引物扩增会出现,假如只有一次或两次,那就不会怀疑是产物二聚了。。。我这里的引物很多,有时条件一不好就会出现,或是Taq酶量一多就出现,就觉得很奇怪,用软件分析过引物和产物,引物的特异性是不用说了,产物还不错啊,不知道怎么出来的
PCR中出现两倍产物大小的条带,怎么回事!经常PCR中会出现两倍目的片段长度的条带,引物特异性也还不错,扩增的模板也是40000bp左右的片段,有时候出现有时候又没了,我想问这类条带是怎样出来
两倍目的片段长度的条带应该不是你的目的片段了,出现这条长带的同时,有其他条带吗?如果有,就是特异性问题.每个基因序列都会有或多或少的碱基片段重复现象,何况是40000bp的序列,所以引物的设计很重要.
增强引物特异性可以试试touchdownPCR.
那可能是你的酶的问题 用的什么酶?还有你做的PCR是普通的PCR吗?酶量和酶的活力对PCR过程会产生比较大的影响.
It is still non-specific annealing, even you said your primers are specific.
Try to increase the annealing temperature to see what happens.
扩增模板在扩增的时候出现了“错”配了。