我现在要做免疫共沉淀检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用,我是个新手,从来没做过,我看过一些文献,文献上说的做法大都不太一样,我有点糊涂了.我想问一下,是不是先提蛋白,然后做免疫沉

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/19 00:46:12
我现在要做免疫共沉淀检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用,我是个新手,从来没做过,我看过一些文献,文献上说的做法大都不太一样,我有点糊涂了.我想问一下,是不是先提蛋白,然后做免疫沉
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我现在要做免疫共沉淀检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用,我是个新手,从来没做过,我看过一些文献,文献上说的做法大都不太一样,我有点糊涂了.我想问一下,是不是先提蛋白,然后做免疫沉淀(加入抗体)做电泳看看蛋白质之间是否有作用就可以了还是需要做更复杂的?请求专业人士解答一下谢谢!

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这个过程简单讲就是这么几步:

抽蛋白

挂抗体到beads上,做成有亲和力的柱子(其实所谓“柱子”就是带有抗体的beads装到Ep管里)

抽出来的蛋白去和柱子孵育,抗体识别的蛋白和与此蛋白互做的蛋白就挂到柱子上了

洗涤,将抗体不能结合的蛋白洗掉

洗脱,可以用蛋白电泳上样缓冲液将beads上的抗体,蛋白,蛋白结合蛋白一起洗下来

电泳

WB检测

之所以叫免疫沉淀,是因为利用了抗体的亲和力,所以叫免疫,而沉淀的意思就是指,抗体挂到beads上,液体里面的物质用固相的beads可以分离出来,所以叫做沉淀.

而上面的7个步骤又会根据实际试验的情况发生变化.所以你看到文献上怎么做的人都有.

如果感兴趣,我建议你可以先读一些general的protocol,例如:http://www.piercenet.com/files/TR0064-Immunoprecipitation-guide.pdf ,再根据自己的实际状况或者是实验的结果再进行选择.

我现在要做免疫共沉淀检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用,我是个新手,从来没做过,我看过一些文献,文献上说的做法大都不太一样,我有点糊涂了.我想问一下,是不是先提蛋白,然后做免疫沉 蛋白和RNA的共沉淀要做蛋白A和miRNA的免疫共沉淀,蛋白是上游,可是看到免疫共沉淀都是蛋白与蛋白之间的作用,这个做RNA的怎么做啊? 做染色体免疫共沉淀(CHIP)一般要多少钱啊? 利用免疫细胞技术怎样检测某种特定蛋白质 免疫共沉淀可以检测基因蛋白表达吗? 免疫共沉淀中相结合的两蛋白质是如何分离的我看IP的实验步骤中,最后都没有将两个蛋白质分开的步骤,难道是在前面的步骤中相结合的两个蛋白质自己已经分开了吗?为什么呢?如若不是,难道 免疫共沉淀与免疫沉淀区别希望说简单点, 设计实验证实并验证未知蛋白质~这个是一年的考试题,感激不尽!分不多,心很诚!实验室通过免疫共沉淀技术分离到一种未知蛋白质,请设计实验方案,利用多种实验技术证实是何种蛋白质并进行 蛋白质电泳的目的虽然问题有点大 但我还是很想知道为什么要做蛋白质电泳 电泳究竟是检测什么东西 求做染色质免疫共沉淀的原理和大致步骤 染色质免疫共沉淀技术Chromatin Immunoprecipitation能做什么用? 做可溶性还原糖与蛋白质的检测实验,化学试剂的用法有何不同 如何检测蛋白质变性 蛋白质用什么检测? 怎么样检测蛋白质二聚体 如何利用免疫荧光技术检测某个蛋白质在体内的含量和分布 双缩脲试剂只能用来检测生物做之中的蛋白质吗 豆浆的不行吗是生物组织... 博奥森生物有限公司的试剂好用吗?现在要做免疫组化检测2个因子,