作业帮[QPCR,荧光定量PCR,实时定时PCR,求助]QPCR的时候为什么用Sybgreen跑出的带不是很准确?直接胶里面加EB条带是正确的?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/08/07 08:33:51
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[QPCR,荧光定量PCR,实时定时PCR,求助]QPCR的时候为什么用Sybgreen跑出的带不是很准确?直接胶里面加EB条带是正确的?
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Sybgreen本身是一种多肽类物质，结合在DNA双螺旋的小沟里，可能会造成拖带啊之类的情况，所以不是很准。但是用也没有问题。
EB的分子量很小，所以会比较准。
实时荧光定量PCR的原理是在反应体系中加入Sybgreen，只要有双螺旋生成，Sybgreen结合上去就会发光，对发光的强度定量，就可以实时监控PCR过程。
Sybgreen对于双螺旋的结合是非特异性的，所以用Sy...
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Sybgreen本身是一种多肽类物质，结合在DNA双螺旋的小沟里，可能会造成拖带啊之类的情况，所以不是很准。但是用也没有问题。
EB的分子量很小，所以会比较准。
实时荧光定量PCR的原理是在反应体系中加入Sybgreen，只要有双螺旋生成，Sybgreen结合上去就会发光，对发光的强度定量，就可以实时监控PCR过程。
Sybgreen对于双螺旋的结合是非特异性的，所以用Sybgreen法定量，误差比较大，非特异性扩增啊引物二聚体啊什么的都会造成误差。tagman探针法比较好一些，特异性好，定量准，但是贵。原理就是在扩增的区域段内设计一段互补的DNA探针，一头连上荧光基团，一头连上淬灭基团，在PCR过程中，酶的外切酶活性会切开DNA探针，两个基团就分离了，荧光基团就可以发光。
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