作业帮百合花植物组织培养实验需要什么
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/28 01:02:26
百合花植物组织培养实验需要什么
百合花植物组织培养实验需要什么
百合花植物组织培养实验需要什么
试剂
· 乙醇.
· 吲哚乙酸（ IAA） 或 2 ,4 – D （生长素类似物）.
· 氯化汞（升汞）或次氯酸钠.
· 6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）
· MS 培养基
·0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl
配制培养基
（ 1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为 10 g/L ,2,4 – D 含量为 2 mg/L ,琼脂10 g/L ）.
（ 2 ）试验培养基：在 MS 培养基中加入 IAA 和 6–BA .
吲哚乙酸（IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解,6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解,然后用蒸馏水稀释,再加入培养基中.
仪器设备
培养室,高压灭菌锅,水浴锅,解剖刀,三角烧瓶（ 100mL ）,烧杯,量筒,组培瓶,组培盖或封口膜,棉线,接种箱或超净工作台,分析天平,长镊子,剪刀,容量瓶,移液管,牛皮纸.
培养基灭菌
将配好的培养基加入琼脂加热溶解,调至 pH 5.8 ,趁热分装于 100 mL组培瓶中,每瓶约 20 mL .待培养基冷却凝固后,盖上组培盖,或盖上封口膜并用棉线扎牢,然后在高压灭菌锅中 121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌 20 min .取出组培瓶放在台子上,冷却后备用.接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水,需同时灭菌.
培养步骤
第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗.把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放入为宜.置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜.易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗.流水冲洗在污染严重时特别有用.洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水.洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的物质,便于灭菌液的直接接触.当然,最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温.
第二步是对材料的表面浸润灭菌.要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等.用70%酒精浸10～30秒.由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,加之70%酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长.有一些特殊的材料,如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用70%酒精处理稍长的时间.处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料.
第三步是用灭菌剂处理.表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取1—2种使用见表.第四步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类,涮洗3-l0次左右.无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意：①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精杀死植物细胞.②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡5分钟.③升汞的渗透力弱,一般浸泡10分钟左右,对植物材料的杀伤力不大.④漂白粉容易导致植物材料失绿,所以对于幼嫩材料要慎用.⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80（一种湿润剂）,可以降低植物材料表面的张力,达到更好的消毒效果.
培养基，灭菌锅，百合不耐热，需要空调。