培养基的定义

培养基的定义
培养基的定义

培养基的定义
培养基
　　培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等.有的培养基还含有抗菌素和色素.
　　按所用原料不同,可分为两类：应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基；应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基.化学试剂中的培养基,大多为合成培养基.由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末.培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同.一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存.对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基）,较长时间的贮存,必须放在2~6.C的冰箱内.
　　常见培养基有：
　　1、细菌培养基
　　配方一 牛肉膏琼脂培养基
　　牛肉膏0.3克 ,蛋白胨1.0克,氯化钠 0.5克,琼脂 1.5克,
　　水 100毫升
　　在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热.待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底.等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟.
　　配方二 马铃薯培养基
　　取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨.在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时.过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右.每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用.
　　配方三 根瘤菌培养基
　　葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克
　　碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克
　　酵母粉 0.4克 琼脂 20克
　　水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升
　　先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用.
　　2、放线菌培养基
　　配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）
　　可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克
　　磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克
　　硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克
　　琼脂 2克 水 100毫升
　　先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解.在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水.调整pH值到7.2～7.4,分装后灭菌,备用.
　　配方二 面粉琼脂培养基
　　面粉 60克 琼脂 20克
　　水 1000毫升
　　把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟.另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用.
　　3、真菌培养基
　　配方一 萨市（Sabouraud’s）培养基
　　蛋白胨 10克 琼脂 20克
　　麦芽糖 40克 水 1000毫升
　　先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖（或葡萄糖）,搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用.
　　本培养菌是培养许多种类真菌所常用的.
　　配方二 马铃薯糖琼脂培养基
　　把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分.在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖）,补足水分,分装,灭菌,备用.
　　把这培养基的pH值调到7.2～7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌.
　　配方三 黄豆芽汁培养基
　　黄豆芽 100克 琼脂 15克
　　葡萄糖 20克 水 1000毫升
　　洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟.用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用.
　　把这培养基的pH值调到7.2～7.4,可用来培养细菌和放线菌.
　　配方四 豌豆琼脂培养基
　　豌豆 80粒 琼脂 5克
　　水 200毫升
　　取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用.
　　4、食用菌菌种培养基
　　配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基
　　20%马铃薯煮汁 1000毫升
　　蔗糖 20克 琼脂 18克
　　把马铃薯洗净去皮后,切成小块.称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤.在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁.在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用.使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定.
　　配方二 综合马铃薯培养基
　　20%马铃薯煮汁 1000 毫升
　　磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克
　　葡萄糖 20克 维生素 10毫克
　　琼脂 18克
　　先配制20%马铃薯煮汁,方法同上.在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6.分装,灭菌,备用. 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种.
　　5.烟草的培养基
　　在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽
　　CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化
　　愈伤组织诱导培养基制备
　　以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.
　　烟草叶片愈伤组织诱导
　　取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解
　　剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种
　　5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同
　　样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观
　　察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.
　　器官分化及植株再生培养
　　将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况.
　　愈伤组织诱导的总体情况
　　烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而
　　未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发
　　生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为
　　60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植
　　体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整
　　个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.
　　特殊培养基：
　　一 选择性培养基
　　1酵母菌富集培养基
　　葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05%
　　孟加拉红0.003% pH4.5
　　2 Ashby无氮培养基 富集好养自生固氮菌
　　甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02%
　　二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5%
　　二 鉴别培养基
　　EMB培养基,常用于鉴别E.coli
　　蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g
　　蒸馏水1000g pH7.2
　　分离海洋微生物的培养基配方
　　2216E培养基配方（固体培养基）
　　蛋白胨 5克
　　酵母膏 1克
　　磷酸高铁 0.01克
　　琼脂 15-----20克
　　陈海水 1000毫升
　　煮沸氢氧化纳（5%）的溶液调PH值7.6—7.8