TA克隆出现假阳性的原因有哪些?嗯...越详细越好```

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/10/06 23:57:41
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TA克隆出现假阳性的原因有哪些?
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首先,你的假阳性的定义是什么呢?是板上长了菌落,而且是白色的,但是里面没有插入片段的意思吗?以下是在这个定义基础上进行的讨论.
第一,TA克隆的自身环化是造成这种现象的最主要原因,根据我的经验,不同公司提供的TA载体的自身环化率在20%到50%之间.这个比例可以通过优化连接反应的条件进行改善.无非就是提高反应体系中目的基因片段的含量,通常DNA:TA载体大概应在1：3左右,加入更多片段可以显著提高链接的效率.再就是提高DNA片段的纯度,减少其中的杂质,这需要通过改进DNA凝胶纯化的方法来实现.QIAGEN的凝胶纯化试剂盒非常好.常量高纯度也好.
第二,除了自身环化之外就是在PCR产物不纯,里面还有引物等小片段,这些东西更容易与TA载体链接,最后进行酶切鉴定时又看不到插入片段.这一般不容易发生,有的人喜欢用柱子纯化PCR产物,我则习惯跑胶后纯化,这样PCR产物和引物等已经完全分离,则不会发生这种情况.
第一点是最主要的,改善链接反应后可以将假阳性的比例降至极低,前段时间我克隆了10个基因,每板挑取4个克隆,其中8个基因的片段插入率都能达到100%.另2两也能达到75%.选用高质量的TA和凝胶纯化试剂盒是关键.推荐QIAGEN的凝胶纯化和PROMEGA的TA克隆.

大片段的连接要加大PCR产物的浓度 连接时间可以适当延长
但是连接时间较长 有时载体会自连造成假阳性

TA克隆出现假阳性的原因有哪些? TA克隆出现假阳性的原因有哪些?嗯...越详细越好``` 基因芯片实验中出现假阳性的原因都有哪些? 用质粒载体进行外源 DNA 片段克隆,经抗生素筛选为何会出现假阳性?如何防止假 阳性的产生?麻烦有经验的大哥大姐详细给教导一下! 有两个启动子的TA克隆载体吗 阳性克隆过程中筛选的目的 RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性 克隆的生物有哪些 TA克隆的具体原理是什么? 植物的向阳性运动有哪些 出现尿蛋白的原因有哪些? 出现尿蛋白的原因有哪些? 克隆人类的坏处有哪些? 克隆给人类的好处有哪些 克隆未知基因的方法有哪些? 与克隆相近的词语有哪些? 生活中有哪些克隆的例子 克隆人的坏处有哪些坏处