p柱层析 N柱层析介绍一下两种层析两者异同,使用范围

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/19 07:33:01
p柱层析 N柱层析介绍一下两种层析两者异同,使用范围
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p柱层析 N柱层析
介绍一下两种层析
两者异同,使用范围

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P-positive,N-negative
分别是阳离子和阴离子交换层析,两者原理类似,根据分离物质的带电属性进行分离,只不过一个是根据带正电的多少,一个是根据带负电的多少进行上柱和洗脱.
Sober 和 Peterson于1956年首次将离子交换基团结合到纤维素上,制成了离子交换纤维素,成功地应用于蛋白质的分离.从此使生物大分子的分级分离方法取得了迅速的发展.离子交换基团不但可结合到纤维上,还可结合到交联葡聚糖（S-ephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）上.近年来离子交换色谱技术已经广泛应用于蛋白质、酶、核酸、肽、寡核苷酸、病毒、噬菌体和多糖的分离和纯化.它的优点是:⑴具有开放性支持骨架,大分子可以自由进入和迅速扩散,故吸附容量大.⑵具有亲水性,对大分子的吸附不大牢固,用温和条件使可以洗脱,不致引起蛋白质变性或酶的失活.⑶多孔性,表面积大、交换容量大,回收率高,可用于分离和制备.
离子交换剂通常是一种不溶性高分子化合物,如树脂,纤维素,葡聚糖,醇脂糖等,它的分子中含有可解离的基团,这些基因在水溶液中能与溶液中的其它阳离子或阴离子起交换作用.虽然交换反应都是平衡反应,但在层析柱上进行时,由于连续添加新的交换溶液,平衡不断按正方向进行,直至完全.因此可以把离子交换剂上的原子离子全部洗脱下来,同理,当一定量的溶液通过交换柱时,由于溶液中的离子不断被交换而浓度逐减少,因此也可以全部被交换并吸附在树脂上.如果有两种以上的成分被交换吸着在离子交换剂上,用洗脱液洗脱时,在被洗脱的能力则决定于各自洗反应的平衡常数.蛋白质的离子交换过程有两个阶段——吸附和解吸附.吸附在离子交换剂上的蛋白质可以通过改变pH使吸附的蛋白质失去电荷而达到解离但更多的是通过增加离子强度,使加入的离子与蛋白质竞争离子交换剂上的电荷位置,使吸附的蛋白质与离子交换剂解开.不同蛋白质与离子交换剂之间形成电键数目不同,即亲和力大小有差异 ,因此只要选择适当的洗脱条件便可将混合物中的组分逐个洗脱下来,达到分离纯化的目的

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