PCR Buffer 的作用是什么?急用,

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/24 06:21:20
PCR Buffer 的作用是什么?急用,
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PCR Buffer 的作用是什么?急用,
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PCR反应的缓冲液的目的是给Taq DNA聚合酶提供一个最适酶催反应条件.目前最为常用的缓冲体系为10-50mmol/L Tris-HCl (pH8.3-8.8,20℃) Tris是一种双极性离子缓冲液,20℃时其pKa值为8.3,△pKa值为-0.021/℃.因此,20mmol/l Tris-HCl(pH8.3,20℃)在实际PCR中,pH变化于6.8-7.8之间.改变反应液的缓冲能力,如将Tris浓度加大到50mmol/L,pH8.9,有时会增加产量.
反应混合液中50mmol/L以内的KCl,pH8.9有利于引物的退火,50mmol/l NaCl或50 mmol/L以上的KCl则抑制Taq DNA聚合酶的活性.有些反应液中以NH+4代K+,其浓度为16.6mmol/L.反应中加入小牛血清白蛋白(100μg/ml)或明胶(0.01%)或Tween 20(0.05% ~0.1%)有助于酶的稳定,反应中加入5mmol/l 的二硫苏糖醇(DTT)也有类似作用,尤其在扩增长片段(此时延伸时间长)时,加入这些酶保护剂对PCR反应是有利的.

A液:变性液 裂解细胞或细菌等等,使所有DNA变性
B液:醋酸钠溶液 中和A液至中性,
C液:酚/氯仿/异戊醇混合液(50:49:1) 抽取RNA
D液:异丙醇
E液:75%乙醇 都是沉淀提取的RNA
F液:DEPC处理的灭菌去离子水 无RNA酶的水,防止RNA降解
G液:RNA酶抑制剂 防止RNA降解
H液:反转录反应液 使反...

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A液:变性液 裂解细胞或细菌等等,使所有DNA变性
B液:醋酸钠溶液 中和A液至中性,
C液:酚/氯仿/异戊醇混合液(50:49:1) 抽取RNA
D液:异丙醇
E液:75%乙醇 都是沉淀提取的RNA
F液:DEPC处理的灭菌去离子水 无RNA酶的水,防止RNA降解
G液:RNA酶抑制剂 防止RNA降解
H液:反转录反应液 使反转录酶具有最大活性的优化缓冲液
I液:反转录酶 使RNA翻转录成DNA
J液:PCR反应液 使Taq酶具有最大活性的优化缓冲液
K液:Taq DNA聚合酶(0.5u/µl) 扩增你所要的DNA片段
L液:矿物油 保持PCR反应管上层不会散热
M液:50倍TAE电泳缓冲液 电泳(鉴定扩增dna片段)所需的缓冲液。
N液:溴化乙锭溶液 嵌入DNA双链中的荧光分子,可在紫外灯下显桔红色。
0液:上样缓冲液 DNA电泳时所需的处理样品的缓冲液,兼有指示电泳进行状态的作用。

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