作业帮无菌操作接种外植体时,应注意哪些方面?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/27 21:58:56
无菌操作接种外植体时,应注意哪些方面?
无菌操作接种外植体时,应注意哪些方面?
无菌操作接种外植体时,应注意哪些方面?
植物外植体消毒和接种：
用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体.在组织培养中,外植体如果是带菌的,在接种前都必须进行表面消毒,这是取得培养成功的最基本的和重要的前提.常用消毒剂对外植体进行消毒.从室外取的材料,一般先用自来水冲洗数分钟,对表面不光滑或长有绒毛等结构不容易洗净的材料,自来水冲洗的时间要长,几个小时或过夜,并且用洗衣粉或洗洁精洗涤,必要时用毛刷刷洗.洗后的材料用滤纸擦干,然后浸泡在消毒溶液中.接种材料使用消毒剂后,要用无菌水洗涤3～5 遍,最后用无菌纸擦干净.使用消毒剂的原则是既要达到消毒目的,又不能损伤植物组织和细胞,还要符合就地取材的原则.对一些容易污染、较难灭菌的外植体进行表面消毒时,用单一消毒剂不能收到好的效果,所以常选用两种消毒剂交替浸泡法.一般,首先用75％乙醇浸泡外植体数秒钟至30s,然后置于0.1％氯化汞溶液5～10min 或含有2％活性氧的次氯酸钠溶液5～30min,然后用无菌水洗涤.有时在氯化汞或次氯酸钠灭菌后,用无菌水洗,进一步剥去几层组织或器官如叶片后,再用次氯酸钠灭菌3～5min,无菌水漂洗3 次后,切割、用于接种.
用消毒剂对接种材料进行灭菌处理时,可以在灭菌溶液中加入1～2 滴表面活性剂,如吐温80或吐温20,它们可以湿润外植体整个组织,促进灭菌液充分接触表面组织,达到较好的消毒效果.有时还可以用磁力搅拌、超声振动等方法使消毒杀菌剂进入外植体.消毒溶液对外植体消毒是在超净工作台上进行.完成表面消毒的接种材料要尽快放置于培养基中.
植物外植体消毒和接种(以胡萝卜为例)：
1 ．接种前,用75 ％乙醇棉球或用2％苯扎溴铵溶液擦拭超净工作台台面,将培养基及用具放入工作台,开超净工作台紫外灯照射至少20 min,然后开送风开关,之后关闭紫外灯,通风10 min后,再开日光灯进行无菌操作.
2 ．将胡萝卜块根在自来水下冲洗干净,用小刀切去外围组织,切成小块分别放100 mL 烧杯中,用75％乙醇溶液浸泡30s,然后用0.1%氯化汞溶液分别浸泡2 、5 、10 min ,用无菌水洗涤3 次,无菌纸吸干水分.取出培养皿,剪刀和镊子使用前插入90％乙醇溶液中,使用镊子时在酒精灯火焰上炽烧片刻,冷却后,切取髓部组织0.5cm .以上操作都要在试管口靠近火焰旁.
3 ．将培养容器斜面向上,并使它们拉于水平位置,也可将培养容器放在左手中.将塞盖用右手拧转松动,以便接种时拔出.用火焰灼烧管口,灼烧时应不断转动试管口（靠手腕的动作,使试管口沾染的少量菌得以烧死）.将烧过的接种针（环）触动培养基部分,使其冷却,以免烧死被接种的外植体,然后轻轻接触外植体,慢慢将接种针（环）抽出试管,打开培养容器盖,将外植体放在培养基上,每瓶放3 块.封口,贴标签,注明姓名,标明时间和材料名称.整理好接种室（箱）的台面,搞好清洁卫生.
4 ．用水洗干净非洲澎蜞菊叶片,用滤纸擦干后置于100 mL 烧杯中,在超净工作台上加入75％乙醇溶液浸泡30s,然后用0.1％氯化汞溶液浸泡3 、5 、7 min,用无菌水洗涤3 次,将叶片切成长1cm ,按照上述同样的步骤接种于培养基上.
5 ．绿豆种子用75％乙醇溶液浸泡30 s,然后用0.1％氯化汞溶液（加入吐温2 滴）浸泡3 、5 、10 min ,期间不断搅拌溶液,用无菌水洗涤5～6 遍,洗干种子外围水分,按照上述同样的步骤接种于培养基上.