作业帮实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/28 08:57:42
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实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不
实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题
我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不同的颜色?如果在样本中加了目的基因和内参的引物,可是只有SYBR Green一种染料,不就分不出两种基因了么?还是我理解的不对?2.相对标准曲线的话,怎么选择合适的样本?网上说需要一个富含内参和目的基因的样本并梯度稀释,最后根据这个曲线来比较不同样本中目的基因的差异.
额,超时了,补充一句
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这个就是SYBR GREEN的局限了.你要做内参 话,必须在不同的管子里面另外在同时做.就像楼下说的那样.这样的话,不同管子见的加样误差就会干扰实验数据.
内参的目的就是来对照加样误差的.
实际上,真正的内参是在同一个管子里面完成的.不过不是用SYBR GREEN来做的.而是用Taqman 引物和探针组合来做的.在同一个管子里面,同时加入你目的基因和内参基因的引物,而目的基因的探针使用FAM荧光素标记,而内参则使用VIC荧光素标记.这样反应同时进行,而且不受不同管子间加样误差的影响.
标准曲线,一般是使用已知浓度的,带有目的基因的质粒来做的.你说的那个方法,不是标准曲线,仍然是相对浓度的梯度稀释而已.
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