色谱分离制备薄板时要注意什么

色谱分离制备薄板时要注意什么
色谱分离制备薄板时要注意什么

色谱分离制备薄板时要注意什么
薄层板的制备是将吸附剂涂布在大小适当的戴板上,形成一定厚度的薄膜.制备一定规格的薄层板,是保证获得满意的分离效果及良好的Rf值重现性必不可少的条件.具体制备方法及有关问题分别讨论如下：
（一）载板：戴板应对各种展开溶剂、化学显色试剂以及温度都具有稳定性,同时又应有一定的机械强度以便重复使用.常用的戴板中,以玻璃最好,一般玻璃只要表面平整光滑,厚度在2—4厘米,允差±0.1—0.2毫米即可.戴板大小无绝对规定,由斯塔尔推荐的标准规格为20×20厘米、20×10厘米.作为一般简单的快速薄层分离,也可用显微镜戴玻片作戴板.至于制备薄层色谱,所用戴板可达20×100厘米.戴板应非常干净,才能保证良好的粘着效果.故玻板应先用肥皂水洗净,再在重铬酸洗液内浸泡,然后清洗干净,最后用蒸馏水淋洗,晾干后备用.玻璃板的缺点是不易保存.
其他材料的戴板中,最常用的为塑料板.塑料戴板制备薄层板操作复杂,因此多为成品薄层板出售.其优点为使用简便,缺点为高温下抗腐蚀性差.其他如不锈钢板也有应用.
（二）吸附剂糊的配制：在选择好适当的戴板后,应根据需要,制备一定粘度的吸附剂匀浆供制备薄层板用.常用各种吸附剂糊的调制方法如下：
（1）硅胶
1）加石膏粘合剂：取硅胶G20克,置于玻璃乳钵中,将40毫升蒸馏水分两次加入,第一次加入30—35毫升,充分研磨后,再加入剩余的水.迅速小心研磨,直至开始出现凝胶状,立即铺板.吸附剂的加水量和加水后的搅拌时间相当重要,是制备薄层板成败的关键.若加水量过多,则吸附剂不易胶化；过少则胶化过快造成涂布困难.搅拌时间无具体规定,一般在45—65秒左右,以吸附剂开始出现凝胶状态时为佳,此时粘度增大,光泽洁白；超过此时则凝胶固化,不易涂布.目前不同厂牌及批号的吸附剂加水量及搅拌时间都有所不同,可以根据具体情况选择最佳条件.（其他无机吸附剂如氧化铝G、硅藻土G的制备方法与硅胶G相似）
2）加淀粉粘合剂：一般是在吸附剂中加入约5%的淀粉及二倍量的水,在沸水浴上加热,不断搅拌至呈一定的粘稠度,进行铺板.
3）加羟甲基纤维素粘合剂：通常取硅胶55克或氧化铝60—80克,加1%羟甲基纤维素水溶液100毫升,调成糊状,进行铺板.
（2）纤维素粉
1）天然纤维素粉：配成15%的纤维素水悬浮液,在电磁搅拌器上混合30—60秒钟,纤维素粉不需加任何粘合剂,即可铺板.
2）微结晶纤维素粉：配制成15%—30%的水悬浮液,电磁搅拌器上充分混合1分钟,即可铺板.搅拌过久可能形成凝胶而失败.
3）乙酰化纤维素粉：根据纤维素乙酰化的程度不同,称取适量,加95%乙醇,充分搅拌后铺板.
（3）聚酰胺粉
取聚酰胺粉12克,加甲醇50毫升,用力充分振摇后铺板.若加入2.5克纤维素粉及40毫升甲醇,在电磁搅拌器上混合成浆,可制成坚固的薄层板.
（4）离子交换剂
1）离子交换树脂：取5克纤维素MN300加少量水搅拌几分钟,再加20—30毫升蒸馏水,继续搅拌,加30克Dowex50树脂,最后加25毫升水,铺板.
2）离子交换纤维素：用蒸馏水配制成10—20%离子交换纤维素,按一般吸附剂铺板法进行铺板,粘着效果良好.
（三）薄层板制备：薄层板的制备方法,目前常用的有浸渍法、倾注法、喷雾法及涂布法.其中最常用的方法为涂布法.各法简述如下：
（1）浸渍法：用于小型薄层板的制备,如戴玻片板.所用的吸附剂糊,最好用有机溶剂来配制,如氯仿-丙酮或氯仿-甲醇混合液.将两张玻片背靠背地贴紧,放在吸附剂糊中浸渍,取出后放在水平板上,即可在玻片上形成薄层.
（2）倾注法：与浸渍法类似,操作简便,不需特殊仪器.将一定量的吸附剂糊,均匀地倾注在玻片上,再入置水平板上,使其形成厚度较为均匀的薄层.
（3）喷雾法：采用气体压力喷雾方法,将吸附剂糊均匀地喷洒在玻片上,形成一层薄层.
（4）涂布法：本法为实验室最常用的薄层板制备法.薄层涂布器由涂布台及涂布仪二者组成,有商品出售.也可以自制,基本结构如图4—1,材料可用不锈钢或有机玻璃.图4—2为一种自制的简易涂布器.这种涂布器有一个活动的闸板,涂布时吸附剂从闸板下的缝隙流出,涂在载板上.根据薄层厚度的要求不同,可制成多种规格缝隙的闸板,以便调换.一般有250、275、500、750、1000和2000微米等规格的闸板.
商品涂布器种类较多,最常用的为斯塔尔型涂布器.涂布法制备薄层板易精确控制厚度,是其最大的优点.其他三种方法都具有不易控制薄层厚度的缺点.
（四）薄层板的活化与贮存：吸附薄层色谱的薄层板,首先应具有一定的吸附活性,才能达到良好的分离效果.薄层板的活度与吸附剂中水份含量有关,水份含量高,则活度减弱.因此,为达到某一规定的吸附活度,就应加温除去薄层中的水份.这一过程称为薄层板的活化,其操作为：将涂布后的薄层板在常温下放置15—20分钟,使水份蒸发、吸附剂凝固.这一过程中薄层板有如下现象：
（1）开始薄层板表面有闪亮光泽.
（2）几分钟后光泽消失.
（3）最后薄层凝固,颜色变白,水份蒸发约50%.
薄层板的活度级可用标准色素测定,其方法如下：
（1）硅胶薄层板的活度测定：称取标准色素奶油黄、苏丹红及靛酚蓝各40毫克,溶于100毫升苯中,将此混合溶液点于已活化的薄层板上,用正已烷或石油醚展开10厘米,所有色素均应停留在原点；而用苯展开10厘米时,则应分离成三个清晰的斑点.其Rf值应分别为：奶油黄0.58,苏丹红0.19,靛酚蓝0.08.而且展开溶剂前沿的上升速度应在30分钟移动10厘米.
（2）氧化铝板的活度测定：称取偶氮苯30毫克,对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红及对氨基偶苯各20毫克,分别溶于50毫升四氯化碳中,并各取10微升点于已活化的氧化铝板上,用四氯化碳为展开溶剂,根据标准色素的Rf值（下表）,查出其活度级.

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薄层板的制备是将吸附剂涂布在大小适当的戴板上，形成一定厚度的薄膜。制备一定规格的薄层板，是保证获得满意的分离效果及良好的Rf值重现性必不可少的条件。具体制备方法及有关问题分别讨论如下：
（一）载板：戴板应对各种展开溶剂、化学显色试剂以及温度都具有稳定性，同时又应有一定的机械强度以便重复使用。常用的戴板中，以玻璃最好，一般玻璃只要表面平整光滑，厚度在2—4厘米，允差±0.1—0.2毫米即可。...

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薄层板的制备是将吸附剂涂布在大小适当的戴板上，形成一定厚度的薄膜。制备一定规格的薄层板，是保证获得满意的分离效果及良好的Rf值重现性必不可少的条件。具体制备方法及有关问题分别讨论如下：
（一）载板：戴板应对各种展开溶剂、化学显色试剂以及温度都具有稳定性，同时又应有一定的机械强度以便重复使用。常用的戴板中，以玻璃最好，一般玻璃只要表面平整光滑，厚度在2—4厘米，允差±0.1—0.2毫米即可。戴板大小无绝对规定，由斯塔尔推荐的标准规格为20×20厘米、20×10厘米。作为一般简单的快速薄层分离，也可用显微镜戴玻片作戴板。至于制备薄层色谱，所用戴板可达20×100厘米。戴板应非常干净，才能保证良好的粘着效果。故玻板应先用肥皂水洗净，再在重铬酸洗液内浸泡，然后清洗干净，最后用蒸馏水淋洗，晾干后备用。玻璃板的缺点是不易保存。
其他材料的戴板中，最常用的为塑料板。塑料戴板制备薄层板操作复杂，因此多为成品薄层板出售。其优点为使用简便，缺点为高温下抗腐蚀性差。其他如不锈钢板也有应用。
（二）吸附剂糊的配制：在选择好适当的戴板后，应根据需要，制备一定粘度的吸附剂匀浆供制备薄层板用。常用各种吸附剂糊的调制方法如下：
（1）硅胶
1）加石膏粘合剂：取硅胶G20克，置于玻璃乳钵中，将40毫升蒸馏水分两次加入，第一次加入30—35毫升，充分研磨后，再加入剩余的水。迅速小心研磨，直至开始出现凝胶状，立即铺板。吸附剂的加水量和加水后的搅拌时间相当重要，是制备薄层板成败的关键。若加水量过多，则吸附剂不易胶化；过少则胶化过快造成涂布困难。搅拌时间无具体规定，一般在45—65秒左右，以吸附剂开始出现凝胶状态时为佳，此时粘度增大，光泽洁白；超过此时则凝胶固化，不易涂布。目前不同厂牌及批号的吸附剂加水量及搅拌时间都有所不同，可以根据具体情况选择最佳条件。（其他无机吸附剂如氧化铝G、硅藻土G的制备方法与硅胶G相似）
2）加淀粉粘合剂：一般是在吸附剂中加入约5%的淀粉及二倍量的水，在沸水浴上加热，不断搅拌至呈一定的粘稠度，进行铺板。
3）加羟甲基纤维素粘合剂：通常取硅胶55克或氧化铝60—80克，加1%羟甲基纤维素水溶液100毫升，调成糊状，进行铺板。
（2）纤维素粉
1）天然纤维素粉：配成15%的纤维素水悬浮液，在电磁搅拌器上混合30—60秒钟，纤维素粉不需加任何粘合剂，即可铺板。
2）微结晶纤维素粉：配制成15%—30%的水悬浮液，电磁搅拌器上充分混合1分钟，即可铺板。搅拌过久可能形成凝胶而失败。
3）乙酰化纤维素粉：根据纤维素乙酰化的程度不同，称取适量，加95%乙醇，充分搅拌后铺板。
（3）聚酰胺粉
取聚酰胺粉12克，加甲醇50毫升，用力充分振摇后铺板。若加入2。5克纤维素粉及40毫升甲醇，在电磁搅拌器上混合成浆，可制成坚固的薄层板。
（4）离子交换剂
1）离子交换树脂：取5克纤维素MN300加少量水搅拌几分钟，再加20—30毫升蒸馏水，继续搅拌，加30克Dowex50树脂，最后加25毫升水，铺板。
2）离子交换纤维素：用蒸馏水配制成10—20%离子交换纤维素，按一般吸附剂铺板法进行铺板，粘着效果良好。
（三）薄层板制备：薄层板的制备方法，目前常用的有浸渍法、倾注法、喷雾法及涂布法。其中最常用的方法为涂布法。各法简述如下：
（1）浸渍法：用于小型薄层板的制备，如戴玻片板。所用的吸附剂糊，最好用有机溶剂来配制，如氯仿-丙酮或氯仿-甲醇混合液。将两张玻片背靠背地贴紧，放在吸附剂糊中浸渍，取出后放在水平板上，即可在玻片上形成薄层。
（2）倾注法：与浸渍法类似，操作简便，不需特殊仪器。将一定量的吸附剂糊，均匀地倾注在玻片上，再入置水平板上，使其形成厚度较为均匀的薄层。
（3）喷雾法：采用气体压力喷雾方法，将吸附剂糊均匀地喷洒在玻片上，形成一层薄层。
（4）涂布法：本法为实验室最常用的薄层板制备法。薄层涂布器由涂布台及涂布仪二者组成，有商品出售。也可以自制，基本结构如图4—1，材料可用不锈钢或有机玻璃。图4—2为一种自制的简易涂布器。这种涂布器有一个活动的闸板，涂布时吸附剂从闸板下的缝隙流出，涂在载板上。根据薄层厚度的要求不同，可制成多种规格缝隙的闸板，以便调换。一般有250、275、500、750、1000和2000微米等规格的闸板。
商品涂布器种类较多，最常用的为斯塔尔型涂布器。涂布法制备薄层板易精确控制厚度，是其最大的优点。其他三种方法都具有不易控制薄层厚度的缺点。
（四）薄层板的活化与贮存：吸附薄层色谱的薄层板，首先应具有一定的吸附活性，才能达到良好的分离效果。薄层板的活度与吸附剂中水份含量有关，水份含量高，则活度减弱。因此，为达到某一规定的吸附活度，就应加温除去薄层中的水份。这一过程称为薄层板的活化，其操作为：将涂布后的薄层板在常温下放置15—20分钟，使水份蒸发、吸附剂凝固。这一过程中薄层板有如下现象：
（1）开始薄层板表面有闪亮光泽。
（2）几分钟后光泽消失。
（3）最后薄层凝固，颜色变白，水份蒸发约50%。
薄层板的活度级可用标准色素测定，其方法如下：
（1）硅胶薄层板的活度测定：称取标准色素奶油黄、苏丹红及靛酚蓝各40毫克，溶于100毫升苯中，将此混合溶液点于已活化的薄层板上，用正已烷或石油醚展开10厘米，所有色素均应停留在原点；而用苯展开10厘米时，则应分离成三个清晰的斑点。其Rf值应分别为：奶油黄0.58，苏丹红0.19，靛酚蓝0.08。而且展开溶剂前沿的上升速度应在30分钟移动10厘米。
（2）氧化铝板的活度测定：称取偶氮苯30毫克，对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红及对氨基偶苯各20毫克，分别溶于50毫升四氯化碳中，并各取10微升点于已活化的氧化铝板上，用四氯化碳为展开溶剂，根据标准色素的Rf值（下表），查出其活度级

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