作业帮巢式PCR中的引物怎么设计
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 19:33:55
xSr@!˝SnA\C.rHF,6p`cK(#h8 J$Tn^{ݓH'aq^ͫy[9vH.UnmKG!+N&#YGN 쥬Ra zXܲR7ϮtUBI~{&3dmp+^[SRi{OΚ֎eD8)!Z6 Z ema=âle&S9u.Sd l,+H)tp}^a\֡:F[wT ]vp Cⱳ4|# 2{GP[L+"A<`FǾ
ܾUTl2zGfI;Hd"6| }
Z#+P%P+謐W }p# C`b &Mm]?i*6I
L Muׂɖ9G>kVp18jOȊ m=Tm }υd"L\W$~J2efg⊟L F<=d.O#.8 ^ 4L:E2r, , YU\j:nS~!s mV
巢式PCR中的引物怎么设计
巢式PCR中的引物怎么设计
巢式PCR中的引物怎么设计
巢式PCR一般是有两对引物的,一对outer引物,一对inner引物.一般建议为了方便,inner引物直接根据目标序列来设计引物（和普通PCR引物设计方式一样）,而outer引物则从目标序列前后两端的序列开始设计,也就是说上下游各往前后移动一些碱基开始设计引物.outer和inner引物的设计应含有重叠区域,重叠区域一般为10bp比较合适.如果说你手上只有目标序列,没有目标序列前后的序列信息的话,你可以使用普通引物作为outer引物,之后再从序列内部设计一对inner引物,原则和之前也是一致的,也应含有10个碱基左右的重叠区域.这时候,因为你的inner引物PCR后产物会少一些碱基序列,你可以设计第三对引物,这对引物为outer和Inner引物的拼接序列,然后进行PCR,将缺失的碱基人工补上.
你想一步巢式还是想两步法巢式，如果两步法，那就跟常规PCR没啥区别。如果一步法，可以考虑外引物和内引物退货温度相差10度左右。