作业帮western blot总蛋白定量必要吗求教一个基础问题：因实验室暂无分光光度计或酶标仪,WB样品不定量行吗?定量完了总蛋白量少的样品加BSA补齐的话,内参和目的蛋白的量是不变的啊,或者各孔蛋白
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/09/28 13:56:44
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western blot总蛋白定量必要吗
求教一个基础问题：因实验室暂无分光光度计或酶标仪,WB样品不定量行吗?定量完了总蛋白量少的样品加BSA补齐的话,内参和目的蛋白的量是不变的啊,或者各孔蛋白量不等会影响电泳?请大家指教,
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总蛋白定量是标准程序．
由于跑胶的时候每个点样孔,每个跑道有一定的容量,加多了会堵塞,加太少则有可能检测不到,造成假阴性.所以有必要对总蛋白量有所控制.但是对有经验的人士来说,做到适量的加样确实不需要分光光度计测量那种精度.
是否有必要定量还是取决于实验的目的.比如,如果不能够定量显示两个跑道加样量相同,则无法根据一粗一细两条带来证明粗条带的样品目的蛋白质表达水平较细条带样品高.当然,你的内参如果显示出一样的均匀的条带,则可以解决这个问题.但是如果总蛋白不定量,内参均匀纯粹是个碰运气一样的事,如果内参粗粗细细乱七八糟,如何解释实验结果呢?
没有听说过加BSA补齐这码事情.
各孔蛋白量不同,只要各孔蛋白量都在胶的容量范围内,理论上来说不影响电泳结果.
我觉得关键要看你的实验目的，western 定量的结果会有很大偏差，最好用蛋白定量仪。
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