过氧化氢酶活性测定公式计算方法请问过氧化氢酶测定公式中As1和As2到底代哪个数值啊?测定方法中说是一分钟测一次,共测4次,那么4个值咋代入公式中呢?

过氧化氢酶活性测定公式计算方法请问过氧化氢酶测定公式中As1和As2到底代哪个数值啊?测定方法中说是一分钟测一次,共测4次,那么4个值咋代入公式中呢?
过氧化氢酶活性测定公式计算方法
请问过氧化氢酶测定公式中As1和As2到底代哪个数值啊?测定方法中说是一分钟测一次,共测4次,那么4个值咋代入公式中呢?

过氧化氢酶活性测定公式计算方法请问过氧化氢酶测定公式中As1和As2到底代哪个数值啊?测定方法中说是一分钟测一次,共测4次,那么4个值咋代入公式中呢?
这样应该可以了吧
一、实验目的：
（1）掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤.
（2）了解酶在提取过程中的两个参数：回收率、纯化倍数.
（3）掌握离心机的使用.
二、实验原理:
邻苯三酚在碱性条件下,能迅速自氧化,释放出O2-,生成带色的中间产物,中间物的积累在滞留30～45s后,与时间成线性关系,一般线性时间维持在4min的范围内,中间物在420nm波长处有强烈光吸收.当有SOD存在时,由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2,从而阻止了中间产物的积累,因此,通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性.
三、实验试剂：
大蒜、冷丙酮、磷酸缓冲液（PH7.8,0.05mol/L)、氯仿-乙醇混合液、邻苯三酚、浓盐酸、天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、50mL离心管 8个、紫外-可见分光光度计、250mL三角瓶8个、玻璃棒8根、试剂瓶250mL 3个、500mL 3个、250mL烧杯16个、试管带胶塞80根、移液管各5根
四、实验步骤：
（1）SOD提取：
称取5g大蒜蒜瓣,加入石英砂研磨破碎细胞,加入15mL的PH7.8 0.05mol/L的磷酸缓冲液,研磨搅拌20分钟,使SOD充分溶解,6000rpm离心,弃去沉淀,得上清液.(留出1mL备用,准确量取剩余上清液体积,记录)
（2）除杂蛋白：
提取液加入1/4体积的氯仿-乙醇混合液搅拌10min,6000rpm离心15min去沉淀,得粗酶液.（取1mL粗酶液备用,精确测量剩余粗酶液体积）
（3）SOD酶的沉淀分离：
剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮,搅拌15min,6000rpm离心15min,得到SOD酶沉淀.将沉淀先加2mL磷酸缓冲液,溶解后再加3mL混匀.6000rpm离心15min,取上清得到SOD酶液.取1mL备用,其余量取体积.
（4）粗酶液活性测定：
提取液、粗酶液、酶液中SOD活力检测,具体步骤如下.
加入邻苯三酚后迅速混匀,准确计时4min,加一滴浓盐酸停止反应,420nm测吸光值.
试剂/（mL）
空白管
对照管OD1
提取液OD2
粗酶液OD2
酶液OD2
PH8.3缓冲液
3
3
3
3
3
SOD提取液
0
0
0.1
0.1
0.1
蒸馏水
2
1.8
1.7
1.7
1.7
室温放置20min
邻苯三酚
0
0.2
0.2
0.2
0.2
（5）溶液中可溶性蛋白含量测定：
分别从1mL备用的提取液、粗酶液、酶液各取0.3mL按以下倍数稀释,260nm/280nm测定吸光值,按公式计算蛋白质浓度.
提取液稀释：50 ×
粗酶液稀释：20 ×
酶液稀释：10 ×
五、实验数据：
提取液
粗酶液
酶液
总体积（ml）
提取液
粗酶液
酶液
260nm吸光度值
280nm吸光度值
公式
蛋白质浓度(mg/ml)=(1.45A280－ 0.74A260) ×稀释倍数
蛋白质浓度（mg/ml）
对照管（OD1）
提取液（OD2）
粗酶液（OD2）
酶液（OD2）
420nm吸光值
六、实验结果及数据处理：
（1）酶活力单位
提取液酶活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
粗酶液活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
酶液活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
（2）总活力
提取液总活力U=活力单位×总体积=
粗酶液总活力=活力单位×总体积=
酶液总活力=活力单位×总体积=
（3）比活力
提取液酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
粗酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
（4）纯化倍数
粗酶液纯化倍数=粗酶液比活力/提取液比活力=
酶液纯化倍数=酶液比活力/提取液比活力=
（5）回收率
粗酶液回收率=粗酶液总活力/提取液总活力=
酶液回收率=酶液总活力/提取液总活力=
七、实验结果误差分析：
（1）研磨和离心大概还不够充分.
（2）由于测量仪器的精密度引起的误差.
（3）在操作的过程中,加入邻苯三酚后未混合均匀,可能致使化学反应进行得不很充分,这可能是造成实验数据与预期不符的一个原因；
（4）在实验过程中,所需化学试剂加入的量不是很准确,这可能是实验数据出现问题的另一个原因；
（5）此外,实验本身还很粗糙,酶的提取、分离和纯化都不能十分彻底,还有很多杂蛋白干扰实验.