作业帮胰蛋白酶分散细胞的作用机理胰蛋白酶分解了什么,使得细胞分离?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/09/29 21:12:14
胰蛋白酶分散细胞的作用机理胰蛋白酶分解了什么,使得细胞分离?
胰蛋白酶分散细胞的作用机理
胰蛋白酶分解了什么,使得细胞分离?
胰蛋白酶分散细胞的作用机理胰蛋白酶分解了什么,使得细胞分离?
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胰蛋白酶分解胞间蛋白
胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的键具有高度的专一性。此外还能催化由碱性氨基酸和羧基形成的酰胺键或酯键，其高度专一性仍表现为对碱性氨基酸一端的选择。胰蛋白酶对这些键的敏感性次序为：酯键> 酰胺键> 肽键。因此可利用含有这些键的酰胺或酯类化合物作为底物来测定胰蛋白酶的活力。目前常用苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺（简称BAPA）和苯甲酰-L-...
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胰蛋白酶能催化蛋白质的水解，对于由碱性氨基酸（精氨酸、赖氨酸）的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的键具有高度的专一性。此外还能催化由碱性氨基酸和羧基形成的酰胺键或酯键，其高度专一性仍表现为对碱性氨基酸一端的选择。胰蛋白酶对这些键的敏感性次序为：酯键> 酰胺键> 肽键。因此可利用含有这些键的酰胺或酯类化合物作为底物来测定胰蛋白酶的活力。目前常用苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺（简称BAPA）和苯甲酰-L-精氨酸-β-萘酰胺（简称BANA）测定酰胺酶活力。用苯甲酰-L-精氨酸乙酯（简称BAEE）和对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯（简称TAME）测定酯酶活力。本实验以BAEE为底物，用紫外吸收法测定胰蛋白酶活力。酶活力单位的规定常因底物及测定方法而异。
保存条件：
4℃保存，一年有效。
注意事项：
? 在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
? 胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。
? 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1.
贴壁细胞的消化：
a) 吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
b) 加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。
c) 显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚
好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
d) 如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。
e) 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部
吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可
用于后续实验。
2. 组织的消化：
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
收起
细胞与细胞不是独立存在的，而是在ECM中通过由蛋白构成的网络相互铰链的，胰蛋白酶就是分解了细胞与细胞之间的蛋白交联，打断其连接，使细胞与细胞分离