本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 23:57:38
本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二
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本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二
本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二抗,是不是我们包被的时候用包被液倍比稀释抗原,并将需检测的蛋白也按照设定的1:20、1:40、1:80、1:160稀释后一起包被过夜?
我在想我是不是可以认定我们有的这个抗原则为我们的标准品,然后来检测我们的蛋白.不甚感激~
我们目前的设计流程是：
1.包被抗原和待测蛋白 4℃过夜
（抗原按照倍比稀释加入包被液为:10,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.15625,0 单位是μg/ml 蛋白1:100稀释都加入)
2.第二天弃液,PBST洗板3次,拍干
3.每孔加入3％BSA封闭至满孔,37℃湿盒湿育 2h
4.洗版,
5.每孔加入稀释好的一抗（1:80）100μl,37℃湿盒湿育 2h
6.洗版,
7.每孔加入辣根酶标记的IgG(1:1000)100ul,37℃湿盒湿育 1h
8.
9.每孔加入100ul底物反应液（现用现配）暗反应15min
10.加入50μl 2MH2SO4 停止反应上机在450nm下测标曲并读值.
目前的问题是：如何能确定我们蛋白的最佳稀释浓度,和一二抗的最佳工作浓度?

本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二
具体做法要看你的实验设计,是要做夹心ELISA还是间接ELISA. 看你的描述应该是夹心法: 包被单抗到孔板上,然后加抗原标准品和未知样品孵育, 然后加HRP标记的二抗,最后TMB显色.
所以你第一步应该是包被液稀释你的一抗,过夜包被,第二天BSA做封闭, 然后测样品.
建议楼主动手前先了解一下基本的ELISA技术知识.
请用google搜索引号内的内容: "Technical Guide for ELISA filetype:pdf"
补充: 你这种方式是直接ELISA,也是最不靠谱的一种方法. 如果你们坚持这样做的话...
1. 标准品和样品的最佳稀释度,这个得做实地测试,看看待测蛋白的信号是个什么水平,再做调整
2. 一二抗的稀释度, 你需要做一个滴定, 比如,给定一定量的标准品,测试1:1000 到1:10000 的一抗和二抗组合,看看那个组合信号高, 同时背景低.

本人看了很多论坛和资料,大多的elisa都是测未知抗原和抗体,因为我是从植物内混合蛋白质中测出目的蛋白的浓度,我们目前有需检测蛋白的相关抗原、自己免疫的多克隆的一抗和HRP-标记的二 这句用英语怎么说地道?通过英文论坛和书籍解决了我很多技术上的问题. 英语和英语口语要怎么学,才能在一年内的时间里可以与外国人轻松对话?注重方法,本人努力型!看了很多关于学英语的资料,感觉都像是浮空一样.本人英语水平一般,六级水平,但是刚刚过,听力 16.国家旅游局在第三届海峡论坛大会上宣布,大陆居民个人赴台旅游正式启动,小丽成为了一名幸运者,她查询了很多关于台湾的资料,你认为不可信的是（ ）A.台湾环岛建有电气化铁路和高速公 QC手法中管制图与直方图具体的相同点和不同点是什么,两者分别达到什么样的目的主要是问个实战的高手来,我本人也看了很多资料,也算是明白了其中的一些,但不是太清晰,高手过来以绝对答 想买一本GMAT OG13的综合,我看还有数学、语文的单册什么的,还用买么?GMAT还有什么其他的必备资料,看了些论坛推荐的资料,太多了.怎么选择啊?现在还出了一本Quantitative的分册,不过没有引进版 清风梦影 注册失败 原因有人在清风梦影论坛注册号了么?我注册了很多次都不行……谁要是有号给我一个.可以共享,我只为了看贴子,不留言,当然如果完全给我也好.愿意给的把ID和密码发给我 读地藏经的反应?我看了不少关于那里的论坛,很不可思议,我去寺庙请了很多经书,我一直想学佛,一直找不到方法,希望能得到 唐朝冬至是怎么过的?在洛卡论坛看了很多关于饺子的做法也知道了冬至的来历,不过谁知道在唐朝是怎么过冬至的呢? exo日本下跪是什么情况日本和中国这关系 真的很上火 我看很多人都脱饭了 本人也在考虑 但还是想知道究竟是怎么回事 ELISA和PCR的原理和用途 不想和同学分享我找来的资料,该怎么回绝?为了学习,家长帮我买了很多学习资料,我自己也下功夫找了一些,我在学校里看的时候被某个同学看到,他叫我借他复印一下,我不太愿意,因为很多是 什么是行政违法和民事违法?我是初中生,学习政治里面行政违法和民事违法,我查了很多资料都不明白!语言最好是初中生看的明白!最好有几个典型的简短的案例说一下! ELISA技术和WESTERN的不同是什么 elisa的原理和实验步骤 新手,看到论坛里面很多说美私美卡的,不懂求告知 什么溶剂才可以进气相?看了很多资料,有说常见能进气相的溶剂最好是不溶于水的,弱极性的比如正己烷、石油醚.但也有说乙酸乙酯、二氯甲烷、四氯甲烷可以进气相.然后本人就晕了.恳请各 电磁场的远场和近场的划分标准是怎样的.看了很多资料,有的说1个波长以内是近场,有的说是3个波长.