elisa双抗体夹心法只加样品稀释液和酶值都很高是怎么回事?我用的是双抗体夹心法,包被抗体的浓度是2ug/ml和5ug/ml.有空白对照和只加样品稀释液和酶对照,空白对照不显色,样品稀释液和酶的显
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/06 17:28:49
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elisa双抗体夹心法只加样品稀释液和酶值都很高是怎么回事?
我用的是双抗体夹心法,包被抗体的浓度是2ug/ml和5ug/ml.有空白对照和只加样品稀释液和酶对照,空白对照不显色,样品稀释液和酶的显色,而且显色很深,有时比加了抗原的值都高.我都做 了1一个月了,还是这样,冲液换的全新的,用的蒸馏水都换 了,还是这样.
我的实验操作步骤
(1)包被:用包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为5 μg/mL。在酶标板反应孔中加0.1 mL,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗板3 每次3 min。
(2)加样:加一定浓度稀释的待检样品0.1 mL 于上述已包被的反应孔中,同时做空白对照,阴性对照(只加样品稀释液)置湿盒中,37℃,1 hr。用洗涤缓冲液洗板3 每次3 min。
(3)加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体 0.1ml。
37℃,0.5 - 1 hr,用洗涤缓冲液洗板3 每次3 min。
(4)加底物液显色:于各反应孔中加入现配的TMB 底物溶液0.1 mL,37 10 - 30min。
(5)终止反应:于各反应孔中加入终止液0.05 mL。
(6)结果判定:将酶标板在酶标仪上,于450 nm读数。
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样品稀释液作为对照也要进行封闭,你封闭了么?如果封闭了那就是样品稀释液有问题了.
还有,你说的酶是什么?