elisa双抗体夹心法只加样品稀释液和酶值都很高是怎么回事?我用的是双抗体夹心法,包被抗体的浓度是2ug/ml和5ug/ml.有空白对照和只加样品稀释液和酶对照,空白对照不显色,样品稀释液和酶的显

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/17 00:06:06
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elisa双抗体夹心法只加样品稀释液和酶值都很高是怎么回事?
我用的是双抗体夹心法,包被抗体的浓度是2ug/ml和5ug/ml.有空白对照和只加样品稀释液和酶对照,空白对照不显色,样品稀释液和酶的显色,而且显色很深,有时比加了抗原的值都高.我都做 了1一个月了,还是这样,冲液换的全新的,用的蒸馏水都换 了,还是这样.
我的实验操作步骤
（1）包被：用包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为5 μg/mL。在酶标板反应孔中加0.1 mL，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗板3 每次3 min。
（2）加样：加一定浓度稀释的待检样品0.1 mL 于上述已包被的反应孔中，同时做空白对照，阴性对照（只加样品稀释液）置湿盒中，37℃，1 hr。用洗涤缓冲液洗板3 每次3 min。
（3）加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体 0.1ml。
37℃，0.5 - 1 hr，用洗涤缓冲液洗板3 每次3 min。
（4）加底物液显色：于各反应孔中加入现配的TMB 底物溶液0.1 mL，37 10 - 30min。
（5）终止反应：于各反应孔中加入终止液0.05 mL。
（6）结果判定：将酶标板在酶标仪上，于450 nm读数。

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样品稀释液作为对照也要进行封闭,你封闭了么?如果封闭了那就是样品稀释液有问题了.
还有,你说的酶是什么?

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