一种植物的根茎叶都含有大量蛋白质,求问一般怎样提取植物中的蛋白质?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/29 07:18:24
一种植物的根茎叶都含有大量蛋白质,求问一般怎样提取植物中的蛋白质?
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一种植物的根茎叶都含有大量蛋白质,求问一般怎样提取植物中的蛋白质?
一种植物的根茎叶都含有大量蛋白质,求问一般怎样提取植物中的蛋白质?

一种植物的根茎叶都含有大量蛋白质,求问一般怎样提取植物中的蛋白质?
植物蛋白质提取方法总汇
　　一、植物组织蛋白质提取方法
　　1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入）,准备提取液放在冰上.
　　2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）.
　　3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
　　4、提取上清液,样品制备完成.
　　蛋白质提取液：300ml
　　1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
　　2、甘油（Glycerol）75ml
　　3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
　　这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
　　二、植物组织蛋白质提取方法
　　氯醋酸—丙酮沉淀法
　　1、在液氮中研磨叶片
　　2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清.
　　3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇）,摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时）,然后真空干燥沉淀,备用.
　　4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准）,可临时保存在4℃待用.
　　5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用.
　　药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮.裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml）,使用前再加入1M的DTT65ul/ml.
　　这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
　　三、组织：肠黏膜
　　目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达
　　应用TRIPURE提取蛋白质步骤：
　　含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）
　　倒转混匀,置室温10min
　　离心：12000 g,10min,4度,弃上清
　　加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）
　　振荡,置室温20min
　　离心：7500g,5 min,4度,弃上清
　　重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次
　　沉淀中加入100％乙醇 2ml
　　充分振荡混匀,置室温20 min
　　离心：7500g,5min,4度,弃上清吹干沉淀
　　1％SDS溶解沉淀
　　离心：10000g,10min,4度
　　取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）
　　存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解,还是很大的一块,4度离心后又多了白色沉定,SDS结晶?测浓度,含量才1mg/ml左右.
　　解决：提蛋白试剂盒,另外组织大小适中,要碎,立即加2X BUFFER,然后煮5－10分钟,效果很好的.
　　四、植物材料：水稻苗,叶鞘,根
　　1、200毫克样品置于冰上磨碎
　　2、加lysis buffer,离心,10000rpm,4度,5min取上清
　　3、重复离心5min
　　lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40
　　五、蛋白质样品制备
　　秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行.
　　100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂,用液氮研磨成粉,加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制,含10mM即0.07%β-巯基乙醇）,混匀,-20℃沉淀1小时,4℃,15000 r/min离心15 min,弃上清,沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇),再于-20℃沉淀1小时,同上离心弃上清,（有必要再用80％丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干.
　　按每mg干粉加入20μl（可调） UKS液[9.5 M尿素,5mM碳酸钾,1.25%SDS,0.5%DTT(二硫苏糖醇),2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc,pH3.5-10),6% Triton X-100],37℃温育30min,期间搅动几次,28度 （温度低,高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min离心15 min,离心力越大时间长一点越好!上清即可上样电泳.或者-70度保存
　　六、植物根中蛋白质的抽取
　　(1) sample,液氮研磨
　　(2) 装1.5 ml centrifuge 用tube
　　(3) 加 1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul
　　(4) 12000 rpm,4度,10-15minite
　　(5) 取上层液,蛋白质就在里面

一种植物的根茎叶都含有大量蛋白质,求问一般怎样提取植物中的蛋白质? 植物的根茎叶 植物的根茎叶有什么作用? 哪些植物的根茎叶有作用 根茎叶是植物的什么器官? 根茎叶与植物的什么有关? 哪些植物有与众不同的根茎叶 何谓植物的根茎? 有一种植物可以吃紫色的跟黄豆根茎叶想辣椒的根茎叶一样俗称羊屎蛋学名是什么 所有的植物都有根茎叶吗? 1、一朵花中主要的结构是（ ）对植物繁衍后代最重要2、生物圈中的绿色植物含有大量孢子的植物中,植株矮小,茎和叶内没有输导组织的是（ ）植物,没有根茎叶等器官的分化的是（ ）植物, 最先有根茎叶分化的植物是什么植物? 根茎叶的繁殖植物有哪些是植物 这是什么植物的根茎? 这是什么植物的根茎? 植物一定有根茎叶 植物为什么有根茎叶 懂植物的进,看看这是什么植物的根茎,这是一种藤曼植物的根茎,但是它到底是什么?