我想要大肠杆菌液体培养所需要的培养基和制作过程

我想要大肠杆菌液体培养所需要的培养基和制作过程
我想要大肠杆菌液体培养所需要的培养基和制作过程

我想要大肠杆菌液体培养所需要的培养基和制作过程
GYT培养基（Tung and Chow 1995）
10%(v/v)甘油
0.125%(m/v)酵母提取物
0.25%(m/v)胰化蛋白胨
使用0.22um滤器过滤除菌,分装成2.5ml一份,保存于4℃.
LB（Luria-Bertani）培养基
配制每升培养基,应在950ml去离子水中加入：
胰化蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 10 g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH值至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min.
M9培养基
配制1L培养基,应在750m1无菌去离子水(冷至50℃或50℃以下)中加入：
5×M9盐溶液 200ml
1 mol/LMgSO4 2 ml
适当碳源的20%溶液(如20%葡萄糖) 20ml
1 mol/LCaCl2 0.1 ml
灭菌的去离子水至980ml.
如果需要,可在M9培养基中补加适当氨基酸和维生素的贮存液.
5×M9盐溶液配制：用无离子水溶解下列盐类,终体积为1L：
Na2HPO4·7H2O 64g
KHPO4 15g
NaCl 2.5g
NH4Cl 5.0g
分装成200ml一份,在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌15min.
分别配制MgSO4溶液和CaCl2溶液,高压灭菌.用无菌水将5×M9盐溶液稀释至980ml后,加入MgSO4和CaCl2溶液.葡萄糖溶液在加到稀释的M9盐溶液之前,用0.22um滤器过滤除菌.当使用含有染色体上脯氨酸生物合成操纵子缺陷[△(lac-proAB)]的大肠杆菌以及互补的proAB基因在F'质粒上时,在M9基本培养基中补加下列成分：
0.4%(m/v)葡萄糖(右旋糖)
5mM MgSO4·7H2O
0.01%硫胺
NZCYM培养基
配制每升培养基,在950ml去离子水中加入：
NZ胺 10g
NaCl 5g
酵母提取物 5g
酪蛋白水解物 1g
MgSO4·7H2O 2g
摇动容器直至溶质完全溶解.用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH值至7.0.用去离子水定容至1L.
在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min.
NZ胺：酪蛋白酶促水解物(ICN Biochemicals公司).
NZCYM、NZYM和NZM也可用BD Biscienses公司的脱水培养基.
NZYM培养基
NZYM培养基除不含酪蛋白水解物外,其他成分与NZCYM培养基相同.
NZM培养基
NZM培养基除不含酵母提取物外,其他成分与NZYM培养基相同.
SOB培养基
配制每升培养基,在950ml去离子水中加入：
胰化蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
NaCl 0.5 g
摇动容器使溶质完全溶解.加10ml 250mmol／L KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液).用5mol/L NaOH调pH值至7.0.用去离子水定容至1L.在15 psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min.该溶液在使用前,加入5ml灭菌的2 mol/l MgCl2[2mol／L MgCl2溶液的配制方法如下：用90ml去离子水溶解19g MgCl2,用去离子水调整体积为100ml,在15psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min].
SOC培养基
SOC培养基除含有20mmol／L葡萄糖外,其他成分与SOB培养基相同.SOB培养基经高压灭菌后冷至60℃或60℃以下,加20ml除菌的1mol／L葡萄糖溶液(1mol/l葡萄糖溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解18g葡萄糖,完全溶解后,用去离子水定容至100ml,用0.22um滤器过滤除菌).
Terrific肉汤(又称TB培养基,Tartof and Hobbs 1987)
配制每升培养基,在900ml去离子水中加入：
胰化蛋白胨 12g
酵母提取物 24g
甘油 4ml
摇动容器使溶质完全溶解.然后在15psi(1.05 kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min.当溶液冷至60℃或60℃以下时加入100ml无菌的0.17mol/L KH2PO4,0.72mol/L K2HPO4溶液[该溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解2.31g KH2PO4和12.54g K2HPO4,完全溶解后,用去离子水定容至100ml并在15psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min.
2×YT培养基
配制每升培养基,在900ml去离子水中加入：
胰化蛋白胨 16g
酵母提取物 10g
NaCl 5g
摇动容器直至溶质溶解,用5N NaOH调pH值至7.0,用去离子水定容至1L.在15psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min.