原生质体分离

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/26 23:23:41
原生质体分离
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原生质体分离
原生质体分离

原生质体分离
原生质分离：酶（纤维素酶,离析酶）
步骤：叶片表面消毒→去除表皮→叶碎片漂浮在含有酶和渗透压稳定剂的溶液中→培育→原生质体沉到培养皿底部→除去酶溶液→将原生质体移入CPW清洗→离心→清洗基质两次→重悬浮于培养基→除去小的个体,用血球计计数→调整到合适的密度重悬浮于培养基.
原生质体的培养：
培养基：MS＋NAA 2.0ppm＋BA 0.5ppm＋3％蔗糖＋9％甘露醇
注意：1、原生质体分离后,非常脆弱,需要渗透压保护剂的保护直到细胞壁形成.
2、针对不同的研究对象,培养基中生长素和细胞分裂素的水平要做适当调整.
影响原生质体培养的因素：营养需求（NH4＋不能过多）,渗压剂,培养密度（105/mL）,
贮藏条件（通常在黑暗处）.
培养方法：液体基质培养法,半液体基质培养法,固体基质培养法,看护培养.
固体培养的步骤：原生质体移入培养基→1体积含原生质体的培养基与1体积含琼脂糖（40℃）的培养基混和→倒转培养皿在25℃下培养→原生质体重新产生细胞壁并分裂成细
胞团→细胞团于琼脂糖基质中传代培养,培养基中应减少渗压剂以利于愈伤组织的形成→诱导分化成植物的根,茎.
原生质体分离培养的意义：1、除去了细胞壁为植物细胞之间的融合扫平了障碍,同时叶为制造新杂种开辟了道路.2、原生质体可摄入外源DNA,细胞器、细菌或病毒颗粒,这些特性与植物全能性相结合为高等植物的遗传饰变打下基础.3、获得细胞无性系和选育突变体的优良起始材料.

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