真菌鉴定的种类有几种?做切片看微观构造属于哪种鉴定方法?

真菌鉴定的种类有几种?做切片看微观构造属于哪种鉴定方法?
真菌鉴定的种类有几种?
做切片看微观构造属于哪种鉴定方法?

真菌鉴定的种类有几种?做切片看微观构造属于哪种鉴定方法?
现代真菌鉴定分型方法
北京大学第一医院(100434) 王端礼
真菌 的 鉴 定不仅是临床的需要,在植物病理学、生物退化、生物技术和环境的研究都很重要.许多真菌已经鉴定到种,但是分类学家仍在忙于新种的描述和其分类的研究.有些菌种由于经济学的关系或是病理学的重要性,有深人的研究,其他则需要现代手段来进行研究.
一 、 形 态学
用表 型 特 征来进行分类鉴定,是过去和现在都普遍应用的方法.致病真菌的鉴定,需要光镜,现在更加上荧光显微镜和细胞化学,还有各种染色法,如子囊泡子染色法.真菌在宿主体内鉴定比较困难,如菌丝只能看到有无分隔,有无色素.需要培养来鉴定菌种.某些病例用种特异性抗体探针非常有用,但此种技术尚未在医真菌学领域内作为常规技术使用.合适的培养基培养鉴定菌种,是常用的方法.
医学 真 菌 学家常见到的是半知菌,要看抱子形态和抱子发生,看产抱细胞,即分生抱子梗.有两种型,一是芽生抱子发生,在产抱细胞上有一小点产生分生抱子,另一是叶状抱子发生,整个细胞是产抱细胞,分成一至数个细胞.基于超微结构观察,有许多词语,但未能普遍应用.有的真菌没有分生抱子,但仍有一些特征,如菌核(sclerotia)、厚壁抱子和一些特殊的菌丝结构,如皮肤癣菌.在少数情况下,一些机会真菌产生有性结构,有许多特点用于菌种鉴定,如子囊菌、担子菌和结合菌.
电镜 , T EM是观察菌的断面,子囊菌酵母和担子菌酵母的横隔不同,SEM在实际应用有许多发现,如子囊菌的表面结构可以鉴定到种.
现 代 形 态学技术,如自动成像分析、电子颗粒体积、分数几何学分析形态学的特点.
由于 表 型 各种词语没有一定的标准,有很大的主观性,某些表型特征也不稳定,受环境影响,有的不能在人工培养基上生长,有一些真菌尚未分类,分类概念有待近一步建立.
二 、分 子 生物学
表型 分 类 受限,生理生化技术在丝状真菌鉴定方面,或是费时费事或是结果不准.分子生物学非常适用.有两种技术,第一,PCR技术,可以分析少量真菌细胞,甚至单个真菌抱子.第二,选择通用寡核昔酸对真菌种特异性引物,测定其核昔酸序列.分子生物学的研究目的由于生物多样性有四个目的.I)系统发生研究.2)分类学的研究,在属、种水平.3)鉴定应用,即决定明确的分类名称.4)流行病学和群体的遗传学研究.具体方法不再详述.
三 、其 他 :
I,生 理 学 和生物化学
在纯 培 养 上真菌生长比较快,可以使用生理、生化方法来鉴定菌种.如黑酵母的鉴定.不同的生长温度也用于鉴定.有性和无性是一个辅助工具.在一定的培养基上,有对照,其生长速度也可用于鉴定,如青霉.AP[系统也用于丝状真菌的鉴定.
2. 次 级 代谢产物
次级 代 谢 产物既不是为了生长需要,也不是介导基本代谢,常常发现它是一个与分了有关的混合物,有特殊的和极罕见的化学结构.常见的是固醇、菇、类碱、香豆素等,某些是真菌毒素.将小量从培养皿切下来的标本,直接进行层析色谱法检查,比传统浓缩抽取提纯法简单易行.此法用于地衣的鉴定较好.很少用于真菌分类,由于对环境有一定影响,而且比较难,较少应用,但有人用于子囊菌的分类.
3. 泛 酉昆 系统
是一 种 初 级代谢产物,起重要作用.泛酿即辅酶Q,是呼吸系统电子传播链的携带者.一些异戊二烯(isoprene)接触醒核各有不同,对鉴定到属或属以下水平很有帮助.主要鉴定细菌和酵母,也用于黑酵母和丝状真菌.
(Ya ma da Y ,e tal. In t.J.Genet 1989;5 6:309 Y ag uchiJ > e tal .M ycoscience 1996;3 7:55)0
4. 脂 肪 酸组成
此法 在 细 菌学方面是常规应用的.一是成分,二是相对浓度.极少用于真菌分类.使用热解气相色谱法、热解块状光谱仪、气相色谱仪、隔膜水相聚合物双相系统等,主要应用这些方法.近来应用气相色谱法合并多变量统计分析方法,成功地用于丝状真菌,包括卵菌、担子菌、结合菌、甚至只有菌丝的真菌.用于种间水平.应注意许多变化,如培养状态和温度是最主要的.
5. 细 胞 壁组成
子 囊 菌 和担子菌含有几丁质和葡萄糖,结合菌含有脱乙酞几丁质(chitosen)和葡聚糖醛酸.不同的皮肤癣菌含有不同的糖分,醉母细胞壁或是缺乏或是含有少量其他多糖(如岩藻搪、乳糖、鼠李糖、木搪等).
6. 蛋 白 质组成
用 电 泳 方法可以产生同工酶,可鉴定到属或种.电泳、免疫学方法、蛋白质分析等可解决种间特性.同工酶分析是一个经济和实用技术.等位基因酶(allozyme)通常用于系统发生的研究.