在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/24 22:07:57
在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来
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在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来
在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒
用pET
30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来
而且，又用能扩出来的菌液划板，再挑单克隆，再扩菌液PCR，就又扩不出来了，我怀疑是切胶回收产物不纯，有原质粒污染，但为什么什么质粒都提不出来。直接诱导表达，会不会太着急了，在没有确定真的连进去目的基因的情况下

在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来
pET 30a 在菌内是偏保守的质粒,拷贝数比较低,建议你做大提质粒,否则带很暗,看不清.
还有,既然你已经菌液PCR有条带了,为什么不诱导表达做western来验证下有没有表达产物?

菌液pcr明显假阳性么，这种情况遇到的太多了。当然不能直接诱导表达，建议你在质粒上设计forward primer，连接片段上设计reverse primer，这样就可以排除假阳性了。重做一次克隆也快，你小心点，重头来遍就可以了，不用急，载体回收好，排除质粒污染，少酶切点，载体一点点就够了，时间长点，NEB的3h，一般的酶酶切过夜。...

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菌液pcr明显假阳性么，这种情况遇到的太多了。当然不能直接诱导表达，建议你在质粒上设计forward primer，连接片段上设计reverse primer，这样就可以排除假阳性了。重做一次克隆也快，你小心点，重头来遍就可以了，不用急，载体回收好，排除质粒污染，少酶切点，载体一点点就够了，时间长点，NEB的3h，一般的酶酶切过夜。

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在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来 培养微生物的培养基中都必须含有碳源、氮源、水和无机盐,有些微生物的培养基中还需要加入生长因子.哪错了 培养微生物的培养基中都必须含有碳源、氮源、水和无机盐,有些微生物的培养基中还需要加入生长因子.为什么错? N14/N15的DNA在含N14的培养基上培养N代,出现轻带和中带 则放射性强度变化的是哪个 N14/N15的DNA在含N14的培养基上培养N代,出现轻带和中带 则放射性强度变化的是哪个? 在含乳糖和葡萄糖的培养基中培养大肠杆菌在含乳糖和少量葡萄糖的培养基中培养大肠杆菌,其生长曲线如图.下列叙述正确的是A．b、d均为对数期,此时大肠杆菌的增殖方式为出芽生殖 B．c时 细菌L型的培养为什么要在低琼脂含血清的培养基中?我知道要高渗的. 在含氨苄青霉素的培养基中培养转入质粒的菌株 菌落周围会出现一圈小菌落 培养细菌的培养基和培养真菌的培养基有什么区别 果蝇培养基 容易长什么霉?开始我的培养基老长青霉,后来重新换的一种在红糖培养基上培养的野生型,我的白糖培养基也变黑了 是为什么?是长菌了吗? 在化妆品和食品生产中,什么样的培养基能够培养霉菌和酵母菌最为准确? 为什么培养后的培养皿外盖老长菌,而培养基不长 为什么培养微生物时,培养基和培养皿要分开消毒,而在配置植物组培的培养基时,可以把培养基倒入锥形瓶一起消毒呢? 微生物培养的一个小问题某微生物X能合成化学物质A,那么,此种微生物就会在含A的培养基中就是死亡.我们老师这样说的.是这样之前发的那弄错了,抱歉 如何检测灭菌后的培养基是否无菌?在微生物的分离和培养实验中, 在培养蘑菇的培养基上长出曲霉,蘑菇和曲霉的关系是? 在培养细菌的通用培养基中,牛肉膏和蛋白胨中含有哪些营养物质 为什么培养用的培养皿和培养基,在接种前必须要高温处理