菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/28 09:22:58
菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相
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菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相
菌液PCR不同条带
将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!
1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相关文献作为考证!
引物一个是19bp 一个是20bp
老师要我在论文中分析原因！

菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相
原来扩增的时候就有两条带,回收的时候（是凝胶回收吗?）可能因为产物浓度过大,导致两条带没跑开,让你一起切下来了（回收后电泳检测了没?）,所以连接后有两种克隆.
至于说为什么会出现两种克隆,要具体问题具体分析咯.
1 可能你的模板有DNA污染,所以同时扩出了DNA的带和cDNA的带；
2 你的基因发生了选择性剪接,有多条成熟的mRNA序列；
3 该基因有一个家族,而你的两条引物分别在两个保守区；
4 引物不特异,或者扩增温度太低.
5 你的片断导入到细菌后发生重组了,这种情况在一些长得快的大肠杆菌中有发生,不过要当你完全排除上面出现的情况时,再考虑这种情况.

Most possible reason is that you have 2 PCR products at first place, one is 750 bp, another is ~1000 bp which is what you expected. Therefore, your bacterial PCR have two clones, 750 bp and 1000 bp.
You can run an agarose gel with your original PCR mix. You can find it out easily.

你的引物比较长吧，不是杂带，是引物聚合体。没事的，结果正常。这种东西哪有什么文献好引的，最底层的实验结果。

菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相 PCR扩增不出来条带的原因? 不同基因组用同一引物扩增,条带一样的原因不同基因组用同一引物PCR扩增,其条带是一样的? 一个引物PCR扩增出的多个条带为什么亮度会不同?用ISSR标记分析遗传多样性,一个引物的PCR扩增结果可以有多个条带,为什么有的条带很亮,有的条带就不太亮? 如何消除PCR的拖尾PCR扩增出来有目的条带,但是有拖尾,呈弥散片 关于PCR的问题：PCR如果目的基因扩增出来了是不是条带中的引物二聚体就没有了呀? PCR扩增产物电泳后显示的条带说明什么? 基因组PCR扩增条带很宽可能的是什么原因?有哪些可以解决的方案?（连续几次实验做出来的条带都比较宽） 琼脂糖凝胶电泳用母液没有条带,而PCR扩增产物有条带,难道是母液的DNA浓度太低,电泳跑不出来? 基因的PCR扩增实验扩增不出DNA条带是什么原因? 在PCR扩增基因时为什么要用限制性内切酶我和一同学都在做基因多态性的实验,我俩选的基因不同,查阅了文献,我做PCR扩增时,不需要限制性内切酶,并且我已做出和文献上一样的基因条带；而 PCR的扩增产物是什么 是如何扩增出来的 pcr扩增没有条带我用别人肯定能作出来的ISSR体系扩增之后为什么什么条带都没有呢,感觉药品应该没有问题.将DNA稀释100倍后用紫外分光光度计测DNA od260/280 1.8左右,符合要求呀,电泳检测只是轻 PCR跑出的条带与目的条带不同怎么办 pcr扩增时出现多条带,目的条带很亮,多余的带比目的条带大,是怎么回事 为什么我们做PCR扩增后条带出不来?我们做PCR的正交体系,其中有几个样怎么也没有东西出来,其他的部分即使有条带出来 效果也特别不好 我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因.另外一个真菌能扩增出来条带 RT- PCR扩增图分析 为什么出来两条带,是什么原因呢